ชุด RT-qPCR โดยตรง II
คำอธิบายชุด:
◮ชุด RT-qPCR โดยตรงโดยใช้ Foreasy Reverse Transcriptase และ Foreasy HS Taq DNA Polymerase ที่พัฒนาโดย Foregene พร้อมบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาเฉพาะ ทำให้ชุดนี้มีความต้านทานสูงและเข้ากันได้ และสามารถทดสอบปฏิกิริยาได้โดยตรงโดยใช้ระบบ Foregene Lysis เป็นแม่แบบชุดนี้สามารถใช้กับชุดตรวจหากรดนิวคลีอิกของ COVID-19 และการพัฒนาชุดตรวจหากรดนิวคลีอิกของแบคทีเรียก่อโรคอื่นๆ
คำอธิบาย
ชุด RT-qPCR โดยตรงให้บัฟเฟอร์ RT-qPCR ที่บรรจุแยกต่างหาก Foreasy HS Taq DNA Polymerase ที่มีประสิทธิภาพสูงและ Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV)ทำให้สะดวกสำหรับการสร้างชุดแบ็คเอนด์และการปรับระบบภายในการตรวจสอบง่ายๆ
ชุด RT-qPCR โดยตรงโดยใช้ Foreasy Reverse Transcriptase และ Foreasy HS Taq DNA Polymerase ที่พัฒนาโดย Foregene พร้อมบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาเฉพาะ ทำให้ชุดนี้มีความต้านทานสูงและเข้ากันได้ และสามารถทดสอบปฏิกิริยาได้โดยตรงโดยใช้ระบบ Foregene Lysis เป็นแม่แบบชุดนี้สามารถใช้กับชุดตรวจหากรดนิวคลีอิกของ COVID-19 และการพัฒนาชุดตรวจหากรดนิวคลีอิกของแบคทีเรียก่อโรคอื่นๆ
ชุดอุปกรณ์นี้สามารถเป็นส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์ IVD ได้โดยตรง ใช้งานง่ายและรวดเร็วต้องการเพียงการยืนยันง่ายๆ โดยไม่ต้องพัฒนาอีก
ข้อมูลจำเพาะ
500T, 50,000T
ส่วนประกอบของชุด
| เนื้อหาชุด (ระบบปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตร) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ต | 50,000 ต | |
| ฟอร์อีซี่ อาร์Everse Transcriptase (200 ยู/μL) | 50 ไมโครลิตร×1 | 1 มล×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 ยู/μL) | 100 ไมโครลิตร×1 | 1 มล×10 |
| 2 × RT-qPCR โดยตรงกันชน | 1 มล. ×5 | 500 มล. ×1 |
| คำแนะนำ | 1 | 1 |
ขั้นตอนการดำเนินงาน
A: เตรียมแม่แบบและน้ำยา
1. เตรียมเทมเพลต RNA ที่เตรียมไว้ (แนะนำให้ใช้ชุดคิท Foregene Total RNA Isolation Kit เพื่อแยกและทำให้เทมเพลต RNA บริสุทธิ์) หรือตัวอย่างผลิตภัณฑ์แคร็ก (แนะนำให้ใช้ระบบ Foregene Lysis) ไพรเมอร์เฉพาะ (10 μM) และอุปกรณ์สิ้นเปลืองอื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง เครื่องมือ
2. ใส่ 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O และ 20× ROX Reference Dye (หากจำเป็น) ลงในกล่องที่มีน้ำแข็ง ทำให้สิ่งเหล่านี้ละลายตามธรรมชาติ และผสมอย่างเบามือ
B: เตรียมระบบ RT-qPCR
รับปริมาตรครึ่งหนึ่งของบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาของระบบปฏิกิริยา (เช่น ถ้าปริมาตรของระบบคือ 20 μL จะต้องได้รับ 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). สำหรับปริมาณเอนไซม์ที่สอดคล้องกันเราขอแนะนำว่าM-MLV：ระบบปฏิกิริยา 10-30 U/20 μL,แท็กดีเอ็นเอโพลิเมอเรส：ระบบปฏิกิริยา 1-2 U/20 μLนี่คือคำแนะนำของเรา คุณควรทดสอบและปรับเปลี่ยน) เพิ่มเทมเพลต RNA ไพรเมอร์และโพรบเฉพาะ และเพิ่ม RNase-Free ddH2O ถึง 20 ไมโครลิตรการเตรียมเฉพาะของระบบปฏิกิริยา RT-qPCR สามารถอ้างอิงได้จากตารางที่ 1 ต่อไปนี้
ตารางที่ 1 จัดเตรียมระบบ RT-qPCR
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ | ความเข้มข้นขั้นสุดท้าย |
| บัฟเฟอร์ RT-qPCR โดยตรง 2 เท่า | 10 ไมโครลิตร | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 ยู | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 ยู | |
| ไพรเมอร์ไปข้างหน้า (10 μM) | 0.8 ไมโครลิตร | 50-900nM |
| รองพื้นย้อนกลับ (10 μM) | 0.8 ไมโครลิตร | 50-900nM |
| โพรบ (4 μM) | 1 ไมโครลิตร | 200nM |
| เทมเพลต (RNA หรือ Lysate) | X ไมโครลิตร | |
| 20× ROX สีย้อมอ้างอิง | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) ไมโครลิตร | |
| ปริมาณรวม | 20 ไมโครลิตร |
หมายเหตุ: Forward Primer และ Reverse Primer เป็นไพรเมอร์เฉพาะของยีนเป้าหมายระบบของ qPCR สามารถปรับได้ตามแบบจำลองการทดลองและ PCRเราขอแนะนำ 400nM สำหรับความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์ส่วนใหญ่โปรดปรับปริมาตรของไพรเมอร์และโพรบตามความเข้มข้นที่เตรียมไว้และความเข้มข้นสุดท้ายที่แนะนำ
1*: เลือกความเข้มข้นสุดท้ายของ ROX Reference Dye ตามเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณที่แตกต่างกันความเข้มข้น ROX Reference Dye ที่เหมาะสมที่สุดของเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณทั่วไปแสดงไว้ในตารางต่อไปนี้:
| เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณ | ความเข้มข้นสุดท้ายของ ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/ขั้นตอนที่หนึ่งเป็นต้น | 1× (ตัวอย่างเช่น เพิ่ม 1μl 20×ROX Reference Dye ในระบบปฏิกิริยา 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P และ Mx4000 เป็นต้น | 0.5× (ตัวอย่างเช่น เพิ่ม 0.5μl 20×ROX Reference Dye ในระบบปฏิกิริยา 20 μL) |
| เครื่องมือ Roche PCR, เครื่องมือ Bio-Rad PCR, เครื่องมือ Eppendorf เชิงปริมาณ PCR เป็นต้น | ไม่มี ROX Reference Dye |
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
ควรเก็บชุดอุปกรณ์ไว้ที่ -20 ± 5°Cควรเก็บไว้ในตู้เย็นอุณหภูมิ -20°C ทันทีอายุการใช้งานคือ 2 ปีหากเก็บไว้ในสภาพที่เหมาะสม
