Animal Total RNA Isolation Kit ชุดสกัดและแยก RNA ทั้งหมดสำหรับเนื้อเยื่อและเซลล์ของสัตว์
คำอธิบายชุด:
สกัด RNA ทั้งหมดที่มีความบริสุทธิ์สูงและมีคุณภาพสูงอย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพจากเนื้อเยื่อสัตว์ต่างๆ
ไม่ต้องกังวลเรื่องการเสื่อมของ RNAทั้งระบบปราศจาก RNase
กำจัด DNA อย่างมีประสิทธิภาพโดยใช้คอลัมน์ทำความสะอาด DNA
ลบ DNA โดยไม่ต้องเพิ่ม DNase
เรียบง่าย—การทำงานทั้งหมดเสร็จสิ้นที่อุณหภูมิห้อง
รวดเร็ว—การดำเนินการจะเสร็จสิ้นภายใน 30 นาที
ปลอดภัย—ไม่ใช้สารอินทรีย์
ความบริสุทธิ์สูง—OD260/280≈1.8-2.1
คำอธิบายชุด
เตรียม 50, เตรียม 200
ชุดนี้ใช้คอลัมน์สปินและสูตรพัฒนาโดยบริษัทของเรา ซึ่งสามารถสกัด RNA รวมที่มีความบริสุทธิ์สูงและมีคุณภาพสูงจากเนื้อเยื่อสัตว์ต่างๆ ด้วยประสิทธิภาพสูง โดยจัดให้มีคอลัมน์ทำความสะอาดดีเอ็นเอที่มีประสิทธิภาพ ซึ่งสามารถแยกและดูดซับดีเอ็นเอจีโนมจากส่วนเหนือตะกอนและไลเซทของเนื้อเยื่อได้อย่างง่ายดาย เรียบง่ายและประหยัดเวลาคอลัมน์ RNA-only สามารถผูก RNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพและสามารถประมวลผลพร้อมกันได้ด้วยสูตรเฉพาะ ตัวอย่างจำนวนมาก
ทั้งระบบปราศจาก RNase ดังนั้น RNA ที่สกัดออกมาจะไม่ถูกย่อยสลายระบบล้างบัฟเฟอร์ Buffer RW1, Buffer RW2 เพื่อให้ RNA ที่ได้รับปราศจากมลพิษของโปรตีน, DNA, ไอออน และสารประกอบอินทรีย์
ส่วนประกอบของชุด
| ชุดแยก RNA ของสัตว์ทั้งหมด | ||
| ส่วนประกอบของชุด | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ต | 200 ต | |
| บัฟเฟอร์ RL1* | 25มล | 100มล |
| บัฟเฟอร์ RL2 | 15มล | 60มล |
| บัฟเฟอร์ RW1* | 25มล | 100มล |
| บัฟเฟอร์ RW2 | 24มล | 96มล |
| ddH2O ที่ปราศจาก RNase | 10มล | 40มล |
| คอลัมน์ RNA เท่านั้น | 50 | 200 |
| คอลัมน์ทำความสะอาด DNA | 50 | 200 |
| คู่มือการใช้งาน | 1 ชิ้น | 1 ชิ้น |
ข้อมูลผลิตภัณฑ์
| รูปแบบ | คอลัมน์สปิน | องค์ประกอบการทำให้บริสุทธิ์ | คอลัมน์ Foregene รีเอเจนต์ |
| ฟลักซ์ | 1-24 ตัวอย่าง | เวลาต่อการเตรียม | ~30 นาที (24 ตัวอย่าง) |
| เครื่องหมุนเหวี่ยง | เครื่องหมุนเหวี่ยงตั้งโต๊ะ | การแยกสารไพโรไลซิส | การแยกแรงเหวี่ยง |
| ตัวอย่าง | เนื้อเยื่อสัตว์เซลล์ | จำนวนตัวอย่าง | เนื้อเยื่อ:10-20 มก.;เซลล์:(1-5)×106 |
| ปริมาณสารละลาย | 50-200 ไมโครลิตร | ปริมาณการโหลดสูงสุด | 850 ไมโครลิตร |
คุณสมบัติและข้อดี
■ ไม่ต้องกังวลเกี่ยวกับการเสื่อมสภาพของ RNA;ทั้งระบบไม่มี RNase
■ กำจัด DNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยใช้ DNA-Cleaning Column
■ ลบ DNA โดยไม่ต้องเพิ่ม DNase
■ การทำงานแบบธรรมดาทั้งหมดเสร็จสิ้นที่อุณหภูมิห้อง
■ รวดเร็ว สามารถดำเนินการให้เสร็จภายใน 30 นาที
■ ปลอดภัย-ไม่ต้องใช้สารอินทรีย์
■ ความบริสุทธิ์สูง -OD260/280≈1.8-2.1
แอปพลิเคชันชุด
เหมาะสำหรับการสกัดและทำให้บริสุทธิ์ RNA ทั้งหมดจากเนื้อเยื่อสัตว์สดหรือแช่แข็งหรือเซลล์เพาะเลี้ยงที่หลากหลาย
พารามิเตอร์ผลิตภัณฑ์
■ การใช้งานขั้นปลาย: การสังเคราะห์ cDNA สายแรก, RT-PCR, การโคลนโมเลกุล, Northern Blot เป็นต้น
■ ตัวอย่าง: เนื้อเยื่อสัตว์ เซลล์เพาะเลี้ยง
■ ปริมาณ: เนื้อเยื่อ 10-20 มก., เซลล์(2-5)×106
■ ความสามารถในการจับ DNA สูงสุดของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์: 80 μg
■ ปริมาณการชะ: 50-200 ไมโครลิตร
แผนภาพ
Animal Total RNA Isolation Kit ได้รับการรักษา 20 มก
ตัวอย่างหนูสด นำ RNA ทั้งหมดบริสุทธิ์ 5% วุ้น 1%
ไกลโคเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส
1: ม้าม 2: ไต
3: ตับ 4: หัวใจ
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
ชุดอุปกรณ์สามารถเก็บไว้ได้นาน 24 เดือนที่อุณหภูมิห้อง (15–25 ℃) หรือ 2–8 ℃ เป็นเวลานานกว่านั้นบัฟเฟอร์ RL1 สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 ℃ เป็นเวลา 1 เดือนหลังจากเติม β- เมอร์แคปโตเอทานอล (ทางเลือก)
บทความที่อ้างถึง
1.ถ้า:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.อนุภาคนาโนคล้ายไขมันที่โหลดด้วย mRNA สำหรับการแก้ไขฐานตับผ่านการเพิ่มประสิทธิภาพการออกแบบคอมโพสิตกลางผู้ช่วยฟังก์ชั่นแม่2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ถ้า:18.187:เหอ X, Hong W, Yang J และคณะการตายของเซลล์ที่เกิดขึ้นเองตามธรรมชาติในการเตรียมสเต็มเซลล์เพื่อการรักษามีผลกระตุ้นภูมิคุ้มกันผ่านการปล่อยฟอสฟาติดิลซีรีนเป้าหมายการส่งสัญญาณ Ther2021 14 ก.ค.;6(1):270.ดอย: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ถ้า:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J และคณะการดัดแปลง N7-Methylguanosine tRNA ช่วยเพิ่มการแปล mRNA ของมะเร็งและส่งเสริมการลุกลามของมะเร็งท่อน้ำดีในตับโมลเซลล์.29 ก.ค. 2564:S1097-2765(21)00555-4.ดอย: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ถ้า:9.225:เฉา X, ซู่ Y, Chen Y, et al.การดัดแปลง m6A ของ Mettl14-Mediated อำนวยความสะดวกในการฟื้นฟูตับโดยการรักษาสภาวะสมดุลของเอนโดพลาสมิกเรติคูลัมCell Mol Gastroenterol เฮปาทอล2021;12(2):633-651.ดอย: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
ชุดแยก RNA สำหรับ แหล่งตัวอย่างอื่นๆมีให้บริการ:
เซลล์ พืช ไวรัส เลือด ฯลฯ
ไม่มีการสกัด RNA หรือผลผลิต RNA ต่ำ
มักจะมีปัจจัยหลายอย่างที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการกู้คืน เช่น: ปริมาณ RNA ของตัวอย่างเนื้อเยื่อ วิธีการดำเนินการ ปริมาณการชะ ฯลฯ
1. ดำเนินการหมุนเหวี่ยงในอ่างน้ำแข็งหรือไครโอเจนิก (4 °C) ระหว่างการทำงาน
คำแนะนำ: ใช้งานที่อุณหภูมิห้อง (15-25°C) ตลอดกระบวนการทั้งหมด ห้ามแช่น้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ
2. การเก็บรักษาตัวอย่างที่ไม่เหมาะสมหรือเวลาเก็บตัวอย่างมากเกินไป
คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างที่อุณหภูมิ -80 °C หรือแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และหลีกเลี่ยงการใช้น้ำแข็งละลายซ้ำๆพยายามใช้เนื้อเยื่อสดหรือเซลล์เพาะเลี้ยงในการสกัด RNA
3. การสลายตัวอย่างไม่เพียงพอ
คำแนะนำ: เมื่อทำการทำให้เนื้อเยื่อเป็นเนื้อเดียวกัน ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเนื้อเยื่อถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันเพียงพอ และเซลล์เนื้อเยื่อถูกแยกออกอย่างเพียงพอเพื่ออธิบายการปลดปล่อย RNA
4. เติมตัวชะไม่ถูกต้อง
คำแนะนำ: ยืนยันว่า RNase-Free ddH2O จะถูกเพิ่มทีละหยดที่ตรงกลางของเมมเบรนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์
5. ไม่ได้เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RL2 หรือ Buffer RW2
คำแนะนำ: ทำตามคำแนะนำ เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RL2 และ Buffer RW2 แล้วผสมให้เข้ากันก่อนใช้ชุด
6. ปริมาณตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ใช้ทิชชู่ 10-20 มก. หรือ (1-5) × 106เซลล์ต่อบัฟเฟอร์ 500 ไมโครลิตร RL1 เนื่องจากการใช้เนื้อเยื่อมากเกินไปอาจส่งผลให้การสกัด RNA ลดลง
7. ปริมาณการชะที่ไม่เหมาะสมหรือการชะที่ไม่สมบูรณ์
คำแนะนำ: ปริมาณการชะของคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์คือ 50-200 ไมโครลิตร;หากผลการชะไม่เป็นที่พอใจ ขอแนะนำให้ยืดเวลาการจัดวางที่อุณหภูมิห้องหลังจากเพิ่ม ddH ที่ปราศจาก RNase ที่อุ่นแล้ว2O เช่น 5-10 นาที
8.คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์มีเอธานอลตกค้างหลังจากการล้างบัฟเฟอร์ RW2
คำแนะนำ: หากมีเอทานอลตกค้างหลังจากการล้างบัฟเฟอร์ RW2 ให้ปั่นแยกหลอดเปล่าเป็นเวลา 1 นาที เวลาสำหรับการปั่นแยกหลอดเปล่าสามารถเพิ่มเป็น 2 นาที หรือสามารถวางคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อกำจัดเอทานอลที่ตกค้างอย่างเพียงพอ
RNA บริสุทธิ์ถูกย่อยสลาย
คุณภาพของ RNA ที่บริสุทธิ์เกี่ยวข้องกับปัจจัยต่างๆ เช่น การเก็บรักษาตัวอย่าง การปนเปื้อนของ RNase และการจัดการ เป็นต้น
1. เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่ทันเวลา
คำแนะนำ: หากตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเซลล์ไม่ได้ใช้ในเวลาที่เหมาะสมหลังการเก็บ ให้เก็บรักษาด้วยความเย็นทันทีที่อุณหภูมิ -80 °C หรือไนโตรเจนเหลวในการแยก RNA ให้ใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเซลล์ที่เพิ่งถ่ายเมื่อทำได้
2. การละลายน้ำแข็งซ้ำของตัวอย่างเนื้อเยื่อ
คำแนะนำ: เมื่อเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อ ทางที่ดีควรตัดเป็นชิ้นเล็กๆ เพื่อการเก็บรักษา และนำชิ้นใดชิ้นหนึ่งออกเมื่อใช้เพื่อหลีกเลี่ยงการละลายน้ำแข็งซ้ำของตัวอย่างและการย่อยสลายของ RNA
3. แนะนำให้ใช้ RNase หรือไม่สวมถุงมือ หน้ากาก ฯลฯ ในระหว่างการผ่าตัด
คำแนะนำ: การทดลองสกัด RNA ทำได้ดีที่สุดในห้องปรับแต่ง RNA ที่แยกจากกัน และล้างตารางก่อนการทดลอง
สวมถุงมือและหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้งในระหว่างการทดลองเพื่อลดการย่อยสลาย RNA ที่เกิดจากการแนะนำของ RNase
4. รีเอเจนต์ปนเปื้อน RNase ระหว่างการใช้งาน
คำแนะนำ: แทนที่ด้วย Animal Total RNA Isolation Kit ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง
5. หลอดปั่นแยก ทิป ฯลฯ ที่ใช้ในการจัดการ RNA ปนเปื้อน RNase
คำแนะนำ: ยืนยันว่าหลอด centrifuge ทิป ปิเปต ฯลฯ ที่ใช้ในการสกัด RNA นั้นปราศจาก RNase ทั้งหมด
RNA ที่ได้รับบริสุทธิ์จะส่งผลต่อการทดลองขั้นปลาย
RNA บริสุทธิ์โดยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ ถ้าไอออนเกลือ ปริมาณโปรตีนมากเกินไปจะส่งผลต่อการทดลองปลายน้ำ เช่น: การถอดความแบบย้อนกลับ Northern Blot et al.
1. RNA ที่ถูกชะออกมีเกลือไอออนตกค้าง
คำแนะนำ: ยืนยันว่าได้เติมเอทานอลในปริมาตรที่ถูกต้องใน Buffer RW2 และทำการล้างคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์ 2 ครั้งด้วยความเร็วแรงเหวี่ยงที่ระบุสำหรับการทำงานหากมีเกลือไอออนตกค้าง ให้ปล่อยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ไว้ที่ Buffer RW2 เป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และทำการปั่นแยกเพื่อกำจัดการปนเปื้อนของเกลือให้ได้มากที่สุด
2. เอทานอลตกค้างใน RNA ที่ชะล้าง
คำแนะนำ: ยืนยันว่าหลังจากการล้างด้วยบัฟเฟอร์ RW2 ให้ดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าที่ความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ระบุสำหรับการทำงาน เพิ่มเวลาของการดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าเป็น 2 นาทีหากยังมีเอทานอลตกค้างอยู่ หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากการปั่นแยกหลอดเปล่าเพื่อให้กำจัดเอทานอลตกค้างได้สูงสุด
