Foreasy HS Taq DNA Polymerase
คำอธิบาย
Foreasy HS Taq DNA Polymerase เป็นเอนไซม์ Taq ตัวใหม่ที่แสดงออกในแบคทีเรียวิศวกรรม Escherichia coli โดยเทคโนโลยีการรวมตัวกันของยีนหลังจากที่เอนไซม์ผ่านกระบวนการพิเศษแล้ว'กิจกรรมของสารถูกยับยั้งก่อนการเปิดใช้งานด้วยความร้อน ดังนั้นจึงยับยั้งการขยายแบบไม่เฉพาะเจาะจงซึ่งเกิดจากการหลอมแบบไม่จำเพาะของไพรเมอร์หรือไพรเมอร์ไดเมอร์ภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำผลิตภัณฑ์นี้เหมาะสำหรับ PCR React ที่มีความเฉพาะเจาะจงสูงไอออน, M ultiple x PCR , เนื้อหา GC สูง (> 60%) ,กับโครงสร้างรองหรืออื่น ๆจีโนมพื้นหลังที่แข็งแกร่งไอซีการขยายและจีโนมขนาดใหญ่ไอซีการตรวจจับการขยายเอนไซม์มีกิจกรรมของ DNA polymerase 5' → 3' และกิจกรรม exonuclease 5' → 3' แต่ไม่มีกิจกรรม 3' → 5' exonuclease
ส่วนประกอบของชุด
ส่วนประกอบ | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/ไมโครลิตร) | 5,000 U (1 มล.) | 50 มก. (10 มล.) | 500 มก. (100 มล.) |
บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา Taq 2 เท่า | 25มล. ×5 | 250 มล. ×5 | 500 มล. × 25 |
คุณสมบัติและข้อดี
- ความจำเพาะสูง: เอนไซม์ที่มีกิจกรรมการเริ่มร้อนสูง
- การขยายอย่างรวดเร็ว: 10 วินาที/kb
- ความสามารถในการปรับเทมเพลตสูง : สามารถใช้เพื่อขยาย High ได้อย่างมีประสิทธิภาพGCค่าและแม่แบบ DNA ที่ขยายยากต่างๆ
- ความเที่ยงตรงสูง: ความเที่ยงตรงเป็น 6 เท่าof เอนไซม์ Taq ธรรมดา
แอปพลิเคชันชุด
- ระบบ PCR/qPCR ต่างๆ และระบบ PCR โดยตรง
- PCR Amplified DNA Fragment
- เครื่องหมายดีเอ็นเอ
- การหาลำดับดีเอ็นเอ
- PCR บวก A หาง
นิยามกิจกรรม
1U : ปริมาณเอนไซม์ที่ต้องการรวม 10 nmol ของดีเอ็นเอลงในสารที่ไม่ละลายในกรดโดยใช้ DNA ของสเปิร์มปลาแซลมอนที่กระตุ้นแล้วเป็นแม่แบบ / ไพรเมอร์ 74 °C 30 นาที
สภาพปฏิกิริยา
อุณหภูมิ | เวลาการเกิดปฏิกิริยา | รอบเวลา |
37°ซ | 5 นาที | 1 |
94°ซ | 5 นาที | 1 |
94°ซ | 10 วินาที | 40 |
60°ซ | 10 วินาที |
บันทึก:สำหรับระบบ 10 µL และ 20 µL ให้เติมน้ำมันแร่ในปริมาตรที่เท่ากัน หากวงจรความร้อนไม่มีฝาปิดความร้อน
สภาวะการเกิดปฏิกิริยา PCR แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับสภาวะทางโครงสร้างของแม่แบบ ไพรเมอร์ และอื่นๆ ในทำนองเดียวกันในการทำงานที่เฉพาะเจาะจง จำเป็นต้องออกแบบสภาวะการเกิดปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุด รวมถึงอุณหภูมิการหลอม เวลาขยาย ฯลฯ ตามเงื่อนไขเฉพาะ เช่น ประเภทแม่แบบ ขนาดของชิ้นส่วนเป้าหมาย ลำดับฐานของชิ้นส่วนขยาย และเนื้อหา GC และความยาวของไพรเมอร์
พื้นที่จัดเก็บ
-20 ± 5 °C เป็นเวลา 2 ปี หรือที่อุณหภูมิ -80 °C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว
ไม่มีการขยายสัญญาณ
1.Taq DNA Polymerase ในชุดอุปกรณ์สูญเสียการทำงานเนื่องจากการจัดเก็บที่ไม่เหมาะสมหรือการหมดอายุของชุดอุปกรณ์
คำแนะนำ: ตรวจสอบเงื่อนไขการจัดเก็บของชุด;เพิ่ม Taq DNA Polymerase ในปริมาณที่เหมาะสมอีกครั้งในระบบ PCR หรือซื้อชุด Real Time PCR ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง
2. มีสารยับยั้ง Taq DNA Polymerase จำนวนมากในแม่แบบ DNA
คำแนะนำ: ทำแม่แบบใหม่หรือลดปริมาณแม่แบบที่ใช้
3.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ 2× Real PCR Mix ที่เรามีคือ 3.5mMอย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม
5.จำนวนแม่แบบน้อยหรือมากเกินไป
คำแนะนำ: ดำเนินการเจือจางการไล่ระดับสีแบบเชิงเส้นของแม่แบบ และเลือกความเข้มข้นของแม่แบบที่มีเอฟเฟกต์ PCR ที่ดีที่สุดสำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
กทช.มีค่าการเรืองแสงสูงเกินไป
1. การปนเปื้อนของน้ำยาที่เกิดขึ้นระหว่างการทำงาน
คำแนะนำ: แทนที่ด้วยรีเอเจนต์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
2.เกิดการปนเปื้อนระหว่างการเตรียมระบบปฏิกิริยา PCR
คำแนะนำ: ใช้มาตรการป้องกันที่จำเป็นระหว่างการทำงาน เช่น สวมถุงมือยาง ใช้ปลายปิเปตกับตัวกรอง ฯลฯ
3.ไพรเมอร์ถูกลดคุณภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะทำให้เกิดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
Primer dimer หรือการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง
1.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ Real PCR EasyTM Mix 2x ที่เรามีให้คือ 3.5 มิลลิโมลาร์อย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
2. อุณหภูมิการหลอม PCR ต่ำเกินไป
คำแนะนำ: เพิ่มอุณหภูมิการหลอม PCR ครั้งละ 1 ℃ หรือ 2 ℃
3.ผลิตภัณฑ์ PCR ยาวเกินไป
คำแนะนำ: ความยาวของผลิตภัณฑ์ Real Time PCR ควรอยู่ระหว่าง 100-150bp ไม่เกิน 500bp
4.ไพรเมอร์จะเสื่อมสภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะนำไปสู่การขยายลักษณะเฉพาะ
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง
ความสามารถในการทำซ้ำของค่าเชิงปริมาณไม่ดี
1. เครื่องทำงานผิดปกติ
คำแนะนำ: อาจมีข้อผิดพลาดระหว่างรู PCR แต่ละรูของเครื่องมือ ส่งผลให้ความสามารถในการทำซ้ำไม่ดีในระหว่างการจัดการหรือการตรวจจับอุณหภูมิโปรดตรวจสอบตามคำแนะนำของอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้อง
2. ความบริสุทธิ์ของตัวอย่างไม่ดี
คำแนะนำ: ตัวอย่างที่ไม่บริสุทธิ์จะทำให้การทดลองทำซ้ำได้ไม่ดี ซึ่งรวมถึงความบริสุทธิ์ของแม่แบบและไพรเมอร์เป็นการดีที่สุดที่จะชำระแม่แบบให้บริสุทธิ์อีกครั้ง และไพรเมอร์ควรทำให้บริสุทธิ์โดย SDS-PAGE
3.เวลาในการเตรียมระบบ PCR และการจัดเก็บนานเกินไป
ข้อแนะนำ: ใช้ระบบ Real Time PCR ในการทดลอง PCR ทันทีหลังการเตรียม และอย่าปล่อยทิ้งไว้นานเกินไป
4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม
5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง