Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready ชุด qRT-PCR ขั้นตอนเดียว
คำอธิบาย
ชุดนี้ใช้ระบบบัฟเฟอร์สลายเฉพาะที่สามารถปลดปล่อย RNA จากตัวอย่างเซลล์เพาะเลี้ยงสำหรับปฏิกิริยา RT-qPCR ได้อย่างรวดเร็ว จึงช่วยขจัดกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ RNA ที่ใช้เวลานานและลำบากสามารถรับเทมเพลต RNA ได้ในเวลาเพียง 7 นาที5×Direct RT Mix และ 2×รีเอเจนต์ qPCR Mix-SYBR โดยตรงที่จัดเตรียมโดยชุดสามารถรับผล PCR เชิงปริมาณตามเวลาจริงได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ
5×Direct RT Mix และ 2×Direct qPCR Mix-SYBR มีความทนทานต่อสารยับยั้งสูง และ lysate ของตัวอย่างสามารถใช้เป็นแม่แบบสำหรับ RT-qPCR ได้โดยตรงชุดนี้ประกอบด้วย RNA รีเวิร์สทรานสคริปเทสที่มีสัมพรรคภาพสูงที่ไม่เหมือนใคร และ Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา, สารเพิ่มประสิทธิภาพ PCR และสารทำให้คงตัว
ข้อมูลจำเพาะ
200×20μl Rxns, 1,000×20μล. Rxns
ส่วนประกอบของชุด
| ส่วนที่ 1 | บัฟเฟอร์ CL |
| ฟอร์จีน โปรตีเอส พลัส II | |
| บัฟเฟอร์ ST | |
| ส่วนที่ 2 | ยางลบดีเอ็นเอ |
| 5× ผสม RT โดยตรง | |
| 2× โดยตรง qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX สีย้อมอ้างอิง | |
| ddH2O ที่ปราศจาก RNase | |
| คำแนะนำ | |
คุณสมบัติและข้อดี
■ง่ายและมีประสิทธิภาพ: ด้วยเทคโนโลยี Cell Direct RT สามารถรับตัวอย่าง RNA ได้ในเวลาเพียง 7 นาที
■ ความต้องการตัวอย่างมีขนาดเล็ก สามารถทดสอบได้ต่ำถึง 10 เซลล์
■ ปริมาณงานสูง: สามารถตรวจจับ RNA ได้อย่างรวดเร็วในเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในเพลต 384, 96, 24, 12, 6 หลุม
■ DNA Eraser สามารถลบจีโนมที่ปล่อยออกมาได้อย่างรวดเร็ว ลดผลกระทบอย่างมากต่อผลการทดลองที่ตามมา
■ ระบบ RT และ qPCR ที่ปรับให้เหมาะสมทำให้การถอดความย้อนกลับ RT-PCR สองขั้นตอนมีประสิทธิภาพมากขึ้น และ PCR เฉพาะเจาะจงมากขึ้น และทนทานต่อสารยับยั้งปฏิกิริยา RT-qPCR มากขึ้น
แอปพลิเคชันชุด
ขอบเขตการใช้งาน: เซลล์เพาะเลี้ยง
- RNA ที่ปล่อยออกมาโดยการสลายตัวอย่าง: ใช้ได้กับเทมเพลต RT-qPCR ของชุดนี้เท่านั้น
- ชุดนี้สามารถใช้เพื่อวัตถุประสงค์ดังต่อไปนี้: การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน การตรวจสอบผลการทำให้เงียบของยีนที่ใช้ siRNA สื่อกลาง การคัดกรองยา ฯลฯ
แผนภาพ
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
ส่วน I ของชุดนี้ควรเก็บไว้ที่ 4 ℃;ส่วนที่สองควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 ℃
Foregene Protease Plus II ควรเก็บไว้ที่ 4℃ ห้ามแช่แข็งที่ -20 ℃
น้ำยา2×ควรเก็บ qPCR Mix-SYBR โดยตรงไว้ที่ -20℃ในที่มืด;หากใช้บ่อยก็เก็บได้นานเช่นกัน 4℃ สำหรับการจัดเก็บระยะสั้น (ใช้ให้หมดภายใน 10 วัน)
หลักการออกแบบไพรเมอร์แบบเรียลไทม์ PCR
ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ย้อนกลับ
สำหรับ Real Time PCR การออกแบบไพรเมอร์มีความสำคัญมากไพรเมอร์เกี่ยวข้องกับความจำเพาะและประสิทธิภาพของการขยาย PCR และสามารถออกแบบโดยอ้างอิงถึงหลักการต่อไปนี้:
ความยาวรองพื้น: 18-30bp.
เนื้อหา GC: 40-60%
ค่า Tm: ซอฟต์แวร์ออกแบบ Primer เช่น Primer 5 สามารถให้ค่า Tm ของ Primer ได้ค่า Tm ของไพรเมอร์อัพสตรีมและดาวน์สตรีมควรใกล้เคียงกันมากที่สุดนอกจากนี้ยังสามารถใช้สูตรการคำนวณ Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)เมื่อดำเนินการ PCR โดยทั่วไปจะเลือกอุณหภูมิที่ต่ำกว่าค่าไพรเมอร์ Tm ที่ 5 °C เป็นอุณหภูมิการหลอม (การเพิ่มอุณหภูมิการหลอมที่สอดคล้องกันสามารถเพิ่มความจำเพาะของปฏิกิริยา PCR)
ผลิตภัณฑ์รองพื้นและ PCR:
การออกแบบไพรเมอร์ PCR ความยาวของผลิตภัณฑ์ขยายควรอยู่ที่ 100-150bp
ไพรเมอร์การออกแบบในพื้นที่โครงสร้างรองของแม่แบบควรหลีกเลี่ยงให้มากที่สุด
หลีกเลี่ยงการก่อตัวของฐานเสริม 2 ฐานขึ้นไประหว่างปลาย 3 ′ของไพรเมอร์ต้นน้ำและปลายน้ำ
ฐานเทอร์มินัล Primer 3 'ไม่สามารถมี G หรือ C ติดต่อกันได้อีก 3 อัน
ไพรเมอร์เองไม่สามารถมีโครงสร้างเสริมกันได้ มิฉะนั้น จะเกิดโครงสร้างกิ๊บซึ่งส่งผลต่อการขยาย PCR
ควรกระจาย ATCG ให้เท่า ๆ กันในลำดับไพรเมอร์และควรหลีกเลี่ยงฐานเทอร์มินัล 3 'เป็น T
ภาคผนวก 1：ชุดเสริมส่วนประกอบ Cell Direct RT-qPCR Kit
1.โซลูชั่นสลายเซลล์
|
| |||
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบสลาย 24 หลุม / หลุม) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ต | 500 ต | ||
| ส่วนหนึ่งฉัน | บัฟเฟอร์ CL | 20 มล | 100 มล |
| ฟอร์จีน โปรตีเอส พลัส II | 400 มล | 1 มล. × 2 | |
| บัฟเฟอร์ ST | 1 มล. × 2 | 10 มล | |
| ส่วนหนึ่งครั้งที่สอง | ยางลบดีเอ็นเอ | 400 มล | 1 มล. × 2 |
2.RT ผสม
|
| |
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตร) | DRT-01011-B1 |
| 200 ต | |
| 5× ผสม RT โดยตรง | 800 มล |
| RNase ฟรี ddH2O | 1.7 มล. × 2 |
|
| ||
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตร) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ต | 1,000 ต | |
| 2× โดยตรง qPCR Mix-SYBR | 1 มล. × 2 | 1.7 มล. × 6 |
| 50× ROX สีย้อมอ้างอิง | 40 มล | 200 มล |
| RNase ฟรี ddH2O | 1.7 มล | 10 มล |
คู่มือการใช้งาน:
