คำอธิบายคำศัพท์พื้นฐานทางอณูชีววิทยา
1. cDNA และ cccDNA: cDNA เป็น DNA แบบเกลียวคู่ที่สังเคราะห์โดย reverse transcriptase จาก mRNA;cccDNA เป็นพลาสมิดที่มีเกลียวสองเส้นปิดแบบวงกลมที่ปราศจากโครโมโซม
2. หน่วยพับมาตรฐาน: หน่วยโครงสร้างทุติยภูมิของโปรตีน α-helix และ β-sheet สามารถสร้างบล็อกโครงสร้างที่มีการจัดเรียงทางเรขาคณิตพิเศษผ่านโพลีเปปไทด์เชื่อมต่อต่างๆการพับที่กำหนดประเภทนี้มักเรียกว่าโครงสร้างทุติยภูมิขั้นสูงสุดโครงสร้างระดับอุดมศึกษาเกือบทั้งหมดสามารถอธิบายได้ด้วยประเภทการพับเหล่านี้ และแม้แต่ประเภทที่รวมกัน ดังนั้น จึงเรียกอีกอย่างว่าหน่วยการพับมาตรฐาน
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) โปรตีนตัวรับ CRP (โปรตีนตัวรับ cAMP) คอมเพล็กซ์ที่เกิดขึ้นหลังจากการรวมกันของ cAMP และ CRP เรียกว่าโปรตีนที่กระตุ้น CAP (โปรตีนที่เปิดใช้งาน cAMP)
4. ลำดับพาลินโดรมิก: ลำดับส่วนเสริมแบบย้อนกลับของส่วนของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ ซึ่งมักเป็นตำแหน่งเอนไซม์จำกัด
5. micRNA: Complementary interfering RNA หรือ antisense RNA ซึ่งเป็นส่วนเสริมของลำดับ mRNA และสามารถยับยั้งการแปลของ mRNA
6. ไรโบไซม์: RNA ที่มีฤทธิ์เร่งปฏิกิริยา ซึ่งมีบทบาทในการเร่งปฏิกิริยาโดยอัตโนมัติในกระบวนการประกบกันของ RNA
7. บรรทัดฐาน: มีบางพื้นที่ที่มีรูปร่างสามมิติและโทโพโลยีที่คล้ายกันในโครงสร้างเชิงพื้นที่ของโมเลกุลโปรตีน
8. Signal peptide: เปปไทด์ที่มีกรดอะมิโนตกค้าง 15-36 ตัวที่ปลาย N ระหว่างการสังเคราะห์โปรตีน ซึ่งจะนำทางเยื่อหุ้มเซลล์ของโปรตีน
9. ตัวลดทอน: ลำดับนิวคลีโอไทด์ระหว่างบริเวณตัวดำเนินการและยีนโครงสร้างที่ยุติการถอดความ
10. Magic Spot: เมื่อแบคทีเรียเติบโตและพบการขาดกรดอะมิโนอย่างสมบูรณ์ แบคทีเรียจะสร้างการตอบสนองฉุกเฉินเพื่อหยุดการแสดงออกของยีนทั้งหมดสัญญาณที่สร้างการตอบสนองฉุกเฉินนี้คือ guanosine tetraphosphate (ppGpp) และ guanosine pentaphosphate (pppGpp)บทบาทของ PpGpp และ pppGpp ไม่ใช่แค่โอเปอเรเตอร์หนึ่งหรือสองสามโอเปอเรเตอร์ แต่ส่งผลกระทบต่อโอเปอเรเตอร์จำนวนมาก ดังนั้นจึงเรียกว่าซุปเปอร์เรกูเลเตอร์หรือเมจิกสปอต
11. องค์ประกอบโปรโมเตอร์อัปสตรีม: หมายถึงลำดับดีเอ็นเอที่มีบทบาทควบคุมในกิจกรรมของโปรโมเตอร์ เช่น TATA ในภูมิภาค -10, TGACA ในภูมิภาค -35, เอนแฮนเซอร์ และตัวลดทอน
12. DNA probe: ส่วนที่ติดฉลากของ DNA พร้อมลำดับที่ทราบ ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจหาลำดับที่ไม่รู้จักและคัดกรองยีนเป้าหมาย
13. ลำดับ SD: เป็นลำดับการจับกันของไรโบโซมและ mRNA ซึ่งควบคุมการแปล
14. โมโนโคลนอลแอนติบอดี: แอนติบอดีที่ทำหน้าที่ต่อต้านตัวกำหนดแอนติเจนเพียงตัวเดียว
15. คอสมิด: เป็นเวกเตอร์ดีเอ็นเอจากภายนอกที่สร้างขึ้นโดยเทียมซึ่งรักษาบริเวณ COS ที่ปลายทั้งสองของฟาจและเชื่อมต่อกับพลาสมิด
16. การคัดกรองจุดสีน้ำเงิน-ขาว: ยีน LacZ (เข้ารหัส β-galactosidase) เอนไซม์สามารถย่อยสลายสารตั้งต้นโครโมโซม X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) เพื่อผลิตสีน้ำเงิน จึงทำให้สายพันธุ์มีสีน้ำเงินเมื่อใส่ DNA จากภายนอกเข้าไป ยีน LacZ จะไม่สามารถแสดงออกได้ และสายพันธุ์จะเป็นสีขาว เพื่อคัดกรองแบคทีเรียรีคอมบิแนนท์สิ่งนี้เรียกว่าการตรวจคัดกรองสีน้ำเงินขาว
17. Cis-acting element: ลำดับเบสเฉพาะใน DNA ที่ควบคุมการแสดงออกของยีน
18. เอนไซม์ Klenow: ชิ้นส่วนขนาดใหญ่ของ DNA polymerase I ยกเว้นว่ากิจกรรม exonuclease 5 ' 3' จะถูกลบออกจาก DNA polymerase I holoenzyme
19. Anchored PCR: ใช้เพื่อขยาย DNA ที่สนใจด้วยลำดับที่ทราบที่ปลายด้านหนึ่งหาง poly-dG ถูกเพิ่มที่ปลายด้านหนึ่งของลำดับที่ไม่รู้จัก จากนั้นจึงใช้ poly-dC และลำดับที่ทราบเป็นไพรเมอร์สำหรับการขยาย PCR
20. ฟิวชั่นโปรตีน: ยีนของโปรตีนยูคาริโอตเชื่อมต่อกับยีนจากภายนอก และโปรตีนที่ประกอบด้วยการแปลของโปรตีนของยีนดั้งเดิมและโปรตีนจากภายนอกจะแสดงออกมาพร้อมกัน
คำศัพท์ทางอณูชีววิทยาอื่นๆ
1. แผนที่ทางกายภาพของ DNA คือลำดับที่ชิ้นส่วน (จำกัด endonuclease-digested) ของโมเลกุล DNA ถูกจัดเรียง
2. ความแตกแยกของ RNase แบ่งออกเป็น 2 ประเภท (แบบอัตโนมัติ) และ (แบบเฮเทอโรคะตาไลซิส)
3. มีสามปัจจัยเริ่มต้นในโปรคาริโอตคือ (IF-1), (IF-2) และ (IF-3)
4. โปรตีนเมมเบรนต้องการคำแนะนำ (เปปไทด์ส่งสัญญาณ) และบทบาทของโปรตีน chaperones คือ (ช่วยพับสายโซ่เปปไทด์ให้เป็นโครงสร้างตามธรรมชาติของโปรตีน)
5. องค์ประกอบในโปรโมเตอร์โดยทั่วไปสามารถแบ่งออกเป็นสองประเภท: (องค์ประกอบโปรโมเตอร์หลัก) และ (องค์ประกอบโปรโมเตอร์ต้นน้ำ)
6. เนื้อหาการวิจัยของอณูชีววิทยาส่วนใหญ่ประกอบด้วยสามส่วน: (อณูชีววิทยาโครงสร้าง) (การแสดงออกของยีนและการควบคุม) และ (เทคโนโลยีการรวมตัวกันของดีเอ็นเอ)
7. การทดลองหลักสองรายการที่แสดงให้เห็นว่า DNA เป็นสารพันธุกรรม ได้แก่ (การติดเชื้อ pneumococcus ของหนู) และ (การติดเชื้อ T2 phage ของ Escherichia coli)ศักยภาพ).
8. มีความแตกต่างหลักสองประการระหว่าง hnRNA และ mRNA: (hnRNA เชื่อมต่อกันในกระบวนการแปลงเป็น mRNA), (ส่วนท้าย 5' ของ mRNA นั้นถูกเพิ่มด้วย m7pGppp cap และมีโพลีอะไนเลชั่นพิเศษที่ปลาย 3' ของหาง mRNA acid (polyA))
9. ข้อดีของโปรตีนในรูปแบบหลายหน่วยย่อยคือ (หน่วยย่อยเป็นวิธีการที่ประหยัดสำหรับการใช้ DNA) (สามารถลดผลกระทบของข้อผิดพลาดแบบสุ่มในการสังเคราะห์โปรตีนต่อกิจกรรมโปรตีน) (กิจกรรมสามารถเปิดและปิดได้อย่างมีประสิทธิภาพและรวดเร็ว)
10. เนื้อหาหลักของทฤษฎีนิวเคลียสของกลไกการพับโปรตีนประกอบด้วย (นิวเคลียส), (การเพิ่มคุณค่าทางโครงสร้าง), (การจัดเรียงใหม่ขั้นสุดท้าย)
11. กาแลคโตสมีผลสองเท่าต่อแบคทีเรียในแง่หนึ่ง (สามารถใช้เป็นแหล่งคาร์บอนสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์)ในทางกลับกัน (มันเป็นส่วนประกอบของผนังเซลล์ด้วย)ดังนั้นโปรโมเตอร์ S2 ที่ไม่ขึ้นกับค่าย CRP จึงจำเป็นสำหรับการสังเคราะห์ถาวรที่ระดับพื้นหลังในเวลาเดียวกัน S1 โปรโมเตอร์ที่ขึ้นกับ cAMP-CRP เป็นสิ่งจำเป็นในการควบคุมการสังเคราะห์ระดับสูงการถอดความเริ่มจาก ( S2 ) ที่มี G และจาก ( S1 ) ไม่มี G
12. เทคโนโลยี Recombinant DNA เรียกอีกอย่างว่า (การโคลนยีน) หรือ (การโคลนโมเลกุล)เป้าหมายสูงสุดคือ (เพื่อถ่ายโอนข้อมูลทางพันธุกรรม DNA ในสิ่งมีชีวิตหนึ่งไปยังอีกสิ่งมีชีวิตหนึ่ง)การทดลองการรวมตัวกันของ DNA ตามปกติโดยทั่วไปประกอบด้วยขั้นตอนต่อไปนี้: (1) แยกยีนเป้าหมาย (หรือยีนจากภายนอก) ของสิ่งมีชีวิตผู้บริจาค และเชื่อมต่อด้วยเอนไซม์กับโมเลกุล DNA อื่น (เวกเตอร์การโคลน) เพื่อสร้างโมเลกุล DNA รีคอมบิแนนท์ใหม่② โมเลกุลดีเอ็นเอลูกผสมถูกถ่ายโอนไปยังเซลล์ผู้รับและทำซ้ำในเซลล์ผู้รับกระบวนการนี้เรียกว่าการเปลี่ยนแปลง③ คัดกรองและระบุเซลล์ผู้รับที่ดูดซับ DNA รีคอมบิแนนท์④เพาะเลี้ยงเซลล์ที่มี recombinant DNA ในปริมาณมากเพื่อตรวจดูว่ามีการแสดงออกของยีนช่วยเหลือแปลกปลอมหรือไม่
13. การจำลองแบบของพลาสมิดมีอยู่สองประเภท: ประเภทที่ถูกควบคุมอย่างเข้มงวดโดยการสังเคราะห์โปรตีนของเซลล์โฮสต์เรียกว่า (พลาสมิดแบบแน่น) และประเภทที่ไม่ได้รับการควบคุมอย่างเข้มงวดโดยการสังเคราะห์โปรตีนของเซลล์โฮสต์เรียกว่า (พลาสมิดที่ผ่อนคลาย)
14. ระบบปฏิกิริยา PCR ควรมีเงื่อนไขดังต่อไปนี้:ไพรเมอร์ DNA (ประมาณ 20 เบส) พร้อมลำดับเสริมที่ปลายแต่ละด้านของยีนเป้าหมายสองเส้นที่จะแยกออกจากกันข.เอนไซม์ที่มีความคงตัวต่อความร้อน เช่น TagDNA polymerasec, dNTPd, ลำดับ DNA ที่น่าสนใจเป็นแม่แบบ
15. กระบวนการปฏิกิริยาพื้นฐานของ PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอน: (การเสียสภาพธรรมชาติ) (การหลอม) และ (การต่อ)
16. กระบวนการพื้นฐานของสัตว์ดัดแปลงพันธุกรรมมักประกอบด้วย: ①การนำยีนแปลกปลอมที่เป็นโคลนเข้าสู่นิวเคลียสของไข่ที่ปฏิสนธิหรือสเต็มเซลล์ของตัวอ่อน②การปลูกถ่ายไข่ที่ปฏิสนธิแล้วหรือสเต็มเซลล์ของตัวอ่อนเข้าไปในมดลูกของผู้หญิง③การพัฒนาและการเจริญเติบโตของตัวอ่อนที่สมบูรณ์ สำหรับลูกหลานที่มียีนต่างประเทศ④ ใช้สัตว์เหล่านี้ที่สามารถผลิตโปรตีนจากต่างประเทศเป็นสต็อกพันธุ์เพื่อขยายพันธุ์โฮโมไซกัสสายพันธุ์ใหม่
17. เซลล์ไฮบริโดมาถูกสร้างขึ้นโดยการไฮบริไดซ์เซลล์ (ม้าม B) กับเซลล์ (มัยอีโลมา) และเนื่องจาก (เซลล์ม้าม) สามารถใช้ไฮโปแซนทีนและ (เซลล์กระดูก) ให้หน้าที่การแบ่งเซลล์ พวกมันจึงสามารถเติบโตในอาหาร HATเติบโต.
18. ด้วยการวิจัยที่ลึกซึ้งยิ่งขึ้น แอนติบอดีรุ่นแรกเรียกว่า (โพลีโคลนอลแอนติบอดี) รุ่นที่สอง (โมโนโคลนอลแอนติบอดี) และรุ่นที่สาม (แอนติบอดีทางพันธุวิศวกรรม)
19. ในปัจจุบัน พันธุวิศวกรรมของไวรัสแมลงมุ่งเน้นไปที่บาคูโลไวรัสเป็นหลัก ซึ่งแสดงให้เห็นในการแนะนำ (ยีนสารพิษจากภายนอก)(ยีนที่ทำลายวงจรชีวิตปกติของแมลง);(การดัดแปลงยีนของไวรัส).
20. ปัจจัยโปรตีนทรานส์แอคติ้งที่สอดคล้องกับองค์ประกอบทั่วไป TATA, GC และ CAAT ในโปรโมเตอร์ RNA polymerase II ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมคือ (TFIID), (SP-1) และ (CTF/NF1) ตามลำดับ
ยี่สิบเอ็ด.ปัจจัยการถอดความพื้นฐานของ RNA polymerase Ⅱ ได้แก่ TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E และลำดับการจับคือ: (D, A, B, E)โดยที่ฟังก์ชันของ TFII-D คือ (ผูกกับกล่อง TATA)
ยี่สิบสอง.ปัจจัยการถอดความส่วนใหญ่ที่เชื่อมโยงกับ DNA ทำงานในรูปของไดเมอร์โดเมนการทำงานของปัจจัยการถอดรหัสที่จับกับ DNA โดยทั่วไปมีดังต่อไปนี้ (เกลียว-เทิร์น-เกลียว), (มาตรฐานนิ้วสังกะสี), (มาตรฐานลิวซีนพื้นฐาน)
ยี่สิบสาม.โหมดการตัดแยกเอ็นโดนิวคลีเอสแบบจำกัดมีสามประเภท: (ตัดที่ด้าน 5' ของแกนสมมาตรเพื่อสร้างปลายเหนียว 5'), (ตัดที่ด้าน 3' ของแกนสมมาตรเพื่อสร้างปลายเหนียว 3' (ตัดที่แกนสมมาตรเพื่อสร้างส่วนแบน) )
ยี่สิบสี่.พลาสมิด DNA มีการกำหนดค่าที่แตกต่างกันสามแบบ: (การกำหนดค่า SC), (การกำหนดค่า oc), (การกำหนดค่า L)สิ่งแรกในอิเล็กโตรโฟรีซิสคือ (การกำหนดค่า SC)
25. ระบบการแสดงออกของยีนภายนอก ส่วนใหญ่ (Escherichia coli), (ยีสต์), (แมลง) และ (ตารางเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม)
26. วิธีการที่ใช้โดยทั่วไปสำหรับสัตว์ดัดแปรพันธุกรรมคือ: (วิธีการติดเชื้อรีโทรไวรัส), (วิธีฉีดดีเอ็นเอด้วยไมโครอินเจกชัน), (วิธีสร้างเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อน)
การประยุกต์ใช้ อณูชีววิทยา
1. บอกชื่อฟังก์ชันของ RNA มากกว่า 5 ตัว?
ถ่ายโอน RNA tRNA ถ่ายโอนกรดอะมิโน ไรโบโซม RNA rRNA ไรโบโซมประกอบด้วยผู้ส่งสาร RNA mRNA แม่แบบการสังเคราะห์โปรตีน RNA นิวเคลียร์ที่แตกต่างกัน RNA hnRNA สารตั้งต้นของ mRNA ที่โตเต็มที่ RNA นิวเคลียร์ขนาดเล็ก snRNA เกี่ยวข้องกับ hnRNA splicing ขนาดเล็ก RNA ไซโตพลาสซึม scRNA/7SL-RNA โปรตีน พลาสมา reticulum-localized และสังเคราะห์ส่วนประกอบของร่างกายการรับรู้สัญญาณ Antisense RNA anRNA/micRNA ควบคุมการแสดงออกของยีน Ribo zyme RNA เอ็นไซม์ RNA ที่ใช้งานอยู่
2. อะไรคือความแตกต่างที่สำคัญระหว่างโปรโมเตอร์โปรคาริโอตและยูคาริโอต?
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------ Initiation Site-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. อะไรคือประเด็นหลักของการสร้างพลาสมิดธรรมชาติเทียม?
พลาสมิดตามธรรมชาติมักมีข้อบกพร่อง จึงไม่เหมาะสำหรับใช้เป็นพาหะสำหรับพันธุวิศวกรรม และต้องมีการปรับปรุงและสร้าง:เพิ่มยีนเครื่องหมายการเลือกที่เหมาะสม เช่น ยีนสองตัวหรือมากกว่าซึ่งง่ายต่อการใช้ในการเลือก ซึ่งโดยปกติจะเป็นยีนของยาปฏิชีวนะข.เพิ่มหรือลดจุดตัดเอ็นไซม์ที่เหมาะสมเพื่ออำนวยความสะดวกในการรวมตัวกันอีกครั้งค.ลดความยาว ตัดชิ้นส่วนที่ไม่จำเป็นออก ปรับปรุงประสิทธิภาพการนำเข้า และเพิ่มความจุในการบรรทุกง.เปลี่ยนสำเนาจากแน่นเป็นหลวมจากสำเนาน้อยลงเป็นสำเนามากขึ้นอีเพิ่มองค์ประกอบทางพันธุกรรมพิเศษตามข้อกำหนดพิเศษของพันธุวิศวกรรม
4. จงยกตัวอย่างวิธีการตรวจหาความแตกต่างของ cDNA เฉพาะเนื้อเยื่อ?
มีการเตรียมประชากรเซลล์สองเซลล์ ยีนเป้าหมายถูกแสดงออกหรือแสดงออกอย่างสูงในเซลล์ใดเซลล์หนึ่ง และยีนเป้าหมายไม่แสดงออกหรือแสดงออกอย่างต่ำในอีกเซลล์ จากนั้นจึงพบยีนเป้าหมายโดยการผสมข้ามพันธุ์และการเปรียบเทียบตัวอย่างเช่น ในระหว่างการเกิดและการพัฒนาของเนื้องอก เซลล์เนื้องอกจะแสดง mRNA ที่มีระดับการแสดงออกที่แตกต่างจากเซลล์ปกติดังนั้นจึงสามารถคัดกรองยีนที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอกได้โดยการผสมข้ามพันธุ์ที่แตกต่างกันวิธีการเหนี่ยวนำยังสามารถใช้เพื่อคัดกรองยีนที่มีการแสดงออก
5. การสร้างและการตรวจคัดกรองเซลล์ไฮบริโดมา?
ม้าม B เซลล์ + เซลล์ myeloma เพิ่ม polyethylene glycol (PEG) เพื่อส่งเสริมการหลอมรวมของเซลล์ และเซลล์การหลอมรวม B-myeloma ม้ามที่ปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ HAT (ประกอบด้วย hypoxanthine, aminopterin, T) ยังคงขยายการหล่อเลี้ยงการหลอมรวมเซลล์ประกอบด้วย: ม้าม-เซลล์หลอมรวมม้าม: ไม่สามารถเติบโตได้ เซลล์ม้ามไม่สามารถเลี้ยงในหลอดทดลองได้เซลล์ฟิวชันของกระดูกและกระดูก: ไม่สามารถใช้ไฮโปแซนทีนได้ แต่สามารถสังเคราะห์พิวรีนผ่านทางวิถีที่สองโดยใช้โฟเลต รีดัคเตสAminopterin ยับยั้งโฟเลต รีดัคเตส ดังนั้นจึงไม่สามารถเติบโตได้เซลล์หลอมรวมกระดูกม้าม: สามารถเติบโตใน HAT เซลล์ม้ามสามารถใช้ไฮโปแซนทีนได้ และเซลล์กระดูกทำหน้าที่แบ่งเซลล์
6. หลักการและวิธีการหาโครงสร้างปฐมภูมิของ DNA ด้วยวิธีการทำลายขั้วไดดีออกซี (Sanger method) คืออะไร?
หลักการคือการใช้ตัวยุติสายโซ่ของนิวคลีโอไทด์—2,,3,-ไดออกซีนิวคลีโอไทด์เพื่อยุติการต่อขยายของดีเอ็นเอเนื่องจากขาด 3-OH ที่จำเป็นสำหรับการสร้างพันธะ 3/5/phosphodiester เมื่อรวมเข้ากับสาย DNA แล้ว สาย DNA จึงไม่สามารถต่อขยายได้อีกตามหลักการของการจับคู่เบส เมื่อใดก็ตามที่ DNA polymerase ต้องการ dNMP เพื่อเข้าร่วมในสาย DNA ที่ขยายตามปกติ มีความเป็นไปได้สองอย่าง หนึ่งคือการเข้าร่วมใน ddNTP ซึ่งส่งผลให้การต่อสาย deoxynucleotide สิ้นสุดลง;อีกวิธีหนึ่งคือการเข้าร่วมใน dNTP เพื่อให้สาย DNA ยังคงสามารถขยายต่อไปได้จนกว่าจะมีการรวม ddNTP ถัดไปตามวิธีนี้สามารถรับกลุ่มของชิ้นส่วน DNA ที่มีความยาวต่างกันที่ลงท้ายด้วย ddNTPวิธีการคือแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มตามลำดับ ddAMP, ddGMP, ddCMP และ ddTMPหลังจากเกิดปฏิกิริยา โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสสามารถอ่านลำดับดีเอ็นเอตามแถบว่ายน้ำได้
7. ผลการควบคุมเชิงบวกของโปรตีนกระตุ้น (CAP) ต่อการถอดความคืออะไร?
Cyclic adenylate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein) คอมเพล็กซ์ที่เกิดจากการรวมกันของ cAMP และ CRP เรียกว่า CAP (cAMPactivated protein)เมื่อเชื้อ E. coli เติบโตในอาหารที่ขาดน้ำตาล การสังเคราะห์ CAP จะเพิ่มขึ้น และ CAP มีหน้าที่กระตุ้นสารก่อการเช่นแลคโตส (Lac)โปรโมเตอร์ที่ขึ้นกับ CRP บางตัวขาดคุณสมบัติลำดับภูมิภาค -35 (TTGACA) ทั่วไปที่โปรโมเตอร์ทั่วไปมีดังนั้นจึงเป็นเรื่องยากที่ RNA polymerase จะจับกับมันการมี CAP (ฟังก์ชัน): สามารถปรับปรุงค่าคงที่การจับกันของเอนไซม์และโปรโมเตอร์ได้อย่างมีนัยสำคัญโดยหลักแล้วจะแสดงสองด้านต่อไปนี้: ① CAP ช่วยให้โมเลกุลของเอนไซม์ปรับทิศทางได้อย่างถูกต้องโดยการเปลี่ยนโครงสร้างของโปรโมเตอร์และการโต้ตอบกับเอนไซม์ เพื่อที่จะรวมกับบริเวณ -10 และมีบทบาทในการแทนที่การทำงานของบริเวณ -35②CAP ยังสามารถยับยั้งการจับกันของ RNA polymerase กับตำแหน่งอื่นๆ ใน DNA ซึ่งจะเป็นการเพิ่มโอกาสในการจับกับโปรโมเตอร์เฉพาะของมัน
8. ขั้นตอนใดบ้างที่รวมอยู่ในการทดลองการรวมตัวกันของ DNA ทั่วไป?
ก.แยกยีนเป้าหมาย (หรือยีนภายนอก) ของสิ่งมีชีวิตผู้บริจาค และเชื่อมต่อด้วยเอนไซม์กับโมเลกุลดีเอ็นเออื่น (เวกเตอร์การโคลน) เพื่อสร้างโมเลกุลดีเอ็นเอลูกผสมใหม่ข.ถ่ายโอนโมเลกุลดีเอ็นเอรีคอมบิแนนต์ไปยังเซลล์ผู้รับและทำซ้ำและเก็บรักษาไว้ในเซลล์ผู้รับกระบวนการนี้เรียกว่าการเปลี่ยนแปลงค.คัดกรองและระบุเซลล์ผู้รับที่ดูดซับดีเอ็นเอรีคอมบิแนนท์ง.เพาะเลี้ยงเซลล์จำนวนมากที่มีดีเอ็นเอรีคอมบิแนนต์เพื่อตรวจดูว่ามีการแสดงออกของยีนช่วยเหลือแปลกปลอมหรือไม่
9. การสร้างคลังยีนมีวิธีการคัดกรองรีคอมบิแนนท์สามวิธีและอธิบายกระบวนการโดยสังเขป
การคัดกรองการดื้อยาปฏิชีวนะ การยับยั้งการดื้อยาแบบแทรก การคัดกรองจุดสีน้ำเงิน-ขาวหรือการคัดกรอง PCR การคัดกรองแยกส่วน การตรวจดีเอ็นเอ เวกเตอร์การโคลนส่วนใหญ่มียีนดื้อยาปฏิชีวนะเมื่อพลาสมิดถูกถ่ายโอนไปยัง Escherichia coli แบคทีเรียจะเกิดการดื้อยา และแบคทีเรียที่ไม่มีการถ่ายโอนจะไม่มีการดื้อยาแต่แยกไม่ออกว่าจัดใหม่หรือไม่ในเวกเตอร์ที่มียีนดื้อยาสองตัว ถ้าชิ้นส่วนของ DNA แปลกปลอมถูกแทรกเข้าไปในยีนตัวใดตัวหนึ่งและทำให้ยีนนั้นถูกปิดใช้งาน ตัวควบคุมเพลตสองตัวที่มีตัวยาต่างกันสามารถใช้เพื่อคัดกรองรีคอมบิแนนท์ที่เป็นบวกได้ตัวอย่างเช่น พลาสมิด pUC มียีน LacZ (เข้ารหัส β-galactosidase) ซึ่งสามารถย่อยสลายสารตั้งต้นโครโมโซม X-gal (5-โบรโม-4-คลอโร-3-อินโดล-β-D-กาแลคโตไซด์) เพื่อสร้างสีน้ำเงิน ซึ่งจะเปลี่ยนสายพันธุ์เป็นสีน้ำเงินเมื่อใส่ DNA แปลกปลอมเข้าไป ยีน LacZ จะไม่สามารถแสดงออกได้ และสายพันธุ์จะเป็นสีขาว เพื่อคัดกรองแบคทีเรียที่ผสมซ้ำ
10. อธิบายขั้นตอนพื้นฐานของการได้รับสัตว์ดัดแปลงพันธุกรรมผ่านเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อน?
เซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อน (ES) เป็นเซลล์ของตัวอ่อนในระหว่างการพัฒนาของตัวอ่อน ซึ่งสามารถเพาะเลี้ยงและเพิ่มจำนวนได้โดยเทียม และมีหน้าที่ในการแยกความแตกต่างออกเป็นเซลล์ประเภทอื่นๆการเพาะเลี้ยงเซลล์ ES: เซลล์ภายในของบลาสโตซิสต์ถูกแยกและเพาะเลี้ยงเมื่อ ES ถูกเลี้ยงในชั้นที่ไม่มีเครื่องป้อน มันจะแยกความแตกต่างออกเป็นเซลล์ที่ทำหน้าที่ต่างๆ เช่น เซลล์กล้ามเนื้อและเซลล์ Nเมื่อเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไฟโบรบลาสต์ ES จะรักษาฟังก์ชันการสร้างความแตกต่างES สามารถจัดการทางพันธุกรรมได้ และฟังก์ชันการหาอนุพันธ์ของมันสามารถรวมเข้าด้วยกันได้โดยไม่กระทบกับฟังก์ชันการหาอนุพันธ์ของมัน ซึ่งจะช่วยแก้ปัญหาการรวมแบบสุ่มนำยีนจากภายนอกเข้าสู่เซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อน จากนั้นฝังเข้าไปในมดลูกของหนูตัวเมียที่ตั้งท้อง พัฒนาเป็นลูก และผสมข้ามพันธุ์เพื่อให้ได้หนูที่มีโฮโมไซกัส
