ไม่มีการขยายสัญญาณ

1.Taq DNA Polymerase ในชุดอุปกรณ์สูญเสียการทำงานเนื่องจากการจัดเก็บที่ไม่เหมาะสมหรือการหมดอายุของชุดอุปกรณ์
คำแนะนำ: ตรวจสอบเงื่อนไขการจัดเก็บของชุด;เพิ่ม Taq DNA Polymerase ในปริมาณที่เหมาะสมอีกครั้งในระบบ PCR หรือซื้อชุด Real Time PCR ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง

2. มีสารยับยั้ง Taq DNA Polymerase จำนวนมากในแม่แบบ DNA
คำแนะนำ: ทำแม่แบบใหม่หรือลดปริมาณแม่แบบที่ใช้

3.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ 2× Real PCR Mix ที่เรามีคือ 3.5mMอย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ

4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม

5.จำนวนแม่แบบน้อยหรือมากเกินไป
คำแนะนำ: ดำเนินการเจือจางการไล่ระดับสีแบบเชิงเส้นของแม่แบบ และเลือกความเข้มข้นของแม่แบบที่มีเอฟเฟกต์ PCR ที่ดีที่สุดสำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์

กทช.มีค่าการเรืองแสงสูงเกินไป

1. การปนเปื้อนของน้ำยาที่เกิดขึ้นระหว่างการทำงาน
คำแนะนำ: แทนที่ด้วยรีเอเจนต์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์

2.เกิดการปนเปื้อนระหว่างการเตรียมระบบปฏิกิริยา PCR
คำแนะนำ: ใช้มาตรการป้องกันที่จำเป็นระหว่างการทำงาน เช่น สวมถุงมือยาง ใช้ปลายปิเปตกับตัวกรอง ฯลฯ

3.ไพรเมอร์ถูกลดคุณภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะทำให้เกิดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์

Primer dimer หรือการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง

1.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ Real PCR EasyTM Mix 2x ที่เรามีให้คือ 3.5 มิลลิโมลาร์อย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ

2. อุณหภูมิการหลอม PCR ต่ำเกินไป
คำแนะนำ: เพิ่มอุณหภูมิการหลอม PCR ครั้งละ 1 ℃ หรือ 2 ℃

3.ผลิตภัณฑ์ PCR ยาวเกินไป
คำแนะนำ: ความยาวของผลิตภัณฑ์ Real Time PCR ควรอยู่ระหว่าง 100-150bp ไม่เกิน 500bp

4.ไพรเมอร์จะเสื่อมสภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะนำไปสู่การขยายลักษณะเฉพาะ
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์

5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง

ความสามารถในการทำซ้ำของค่าเชิงปริมาณไม่ดี

1. เครื่องทำงานผิดปกติ
คำแนะนำ: อาจมีข้อผิดพลาดระหว่างรู PCR แต่ละรูของเครื่องมือ ส่งผลให้ความสามารถในการทำซ้ำไม่ดีในระหว่างการจัดการหรือการตรวจจับอุณหภูมิโปรดตรวจสอบตามคำแนะนำของอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้อง

2. ความบริสุทธิ์ของตัวอย่างไม่ดี
คำแนะนำ: ตัวอย่างที่ไม่บริสุทธิ์จะทำให้การทดลองทำซ้ำได้ไม่ดี ซึ่งรวมถึงความบริสุทธิ์ของแม่แบบและไพรเมอร์เป็นการดีที่สุดที่จะชำระแม่แบบให้บริสุทธิ์อีกครั้ง และไพรเมอร์ควรทำให้บริสุทธิ์โดย SDS-PAGE

3.เวลาในการเตรียมระบบ PCR และการจัดเก็บนานเกินไป
ข้อแนะนำ: ใช้ระบบ Real Time PCR ในการทดลอง PCR ทันทีหลังการเตรียม และอย่าปล่อยทิ้งไว้นานเกินไป

4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม

5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง