คู่มือวิเคราะห์ปัญหา

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

ผลผลิตต่ำหรือไม่มี DNA

โดยปกติแล้วจะมีปัจจัยหลายอย่างที่ส่งผลต่อผลผลิตของจีโนมดีเอ็นเอ รวมถึงแหล่งที่มาของตัวอย่าง อายุของตัวอย่าง สภาวะการเก็บรักษาตัวอย่าง และการดำเนินการ

ไม่สามารถรับ DNA ของจีโนมได้ในระหว่างการสกัด

1. เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่ออย่างไม่เหมาะสมหรือเก็บไว้นานเกินไป ส่งผลให้ DNA ของจีโนมเสื่อมโทรม

คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อในไนโตรเจนเหลวหรือ -20°ค;พยายามใช้ตัวอย่างที่เก็บใหม่สำหรับการสกัดจีโนมดีเอ็นเอ

2. จำนวนตัวอย่างน้อยเกินไปอาจทำให้ไม่สามารถแยก DNA ของจีโนมที่เกี่ยวข้องได้

คำแนะนำ: สำหรับตัวอย่างเนื้อเยื่อที่เก็บไว้เป็นเวลานานหรือมีการย่อยสลาย DNA ของจีโนมอย่างรุนแรง ควรเพิ่มจำนวนตัวอย่างเนื้อเยื่ออย่างเหมาะสมเพื่อสกัด DNA ของจีโนมในปริมาณมากสามารถกำหนดปริมาณของตัวอย่างได้ตามความต้องการของ DNA แต่ตัวอย่างสดไม่ควรเกิน 100 มก. และตัวอย่างแห้งไม่ควรเกิน 30 มก.

3. ไม่บดตัวอย่างด้วยไนโตรเจนเหลวหรือวางหลังจากไนโตรเจนเหลวนานเกินไป

คำแนะนำ: ในระหว่างการสกัด DNA ตัวอย่างจำเป็นต้องบดด้วยไนโตรเจนเหลวเพื่อทำให้ผนังเซลล์แตกหลังจากการบด โปรดถ่ายโอนตัวอย่างผงไปยัง PL1 ที่อุ่นที่อุณหภูมิ 65°C โดยเร็วที่สุด (เมื่อผงดินละลายแล้ว DNA ของจีโนมจะเริ่มย่อยสลายอย่างรวดเร็ว)

4. การจัดเก็บ Foregene Protease ที่ไม่เหมาะสมส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน

คำแนะนำ: ยืนยันสภาวะการเก็บรักษา Foregene Protease หรือแทนที่ด้วย Foregene Protease ใหม่สำหรับการย่อยด้วยเอนไซม์

5. จัดเก็บชุดอุปกรณ์อย่างไม่เหมาะสมหรือเก็บไว้นานเกินไป ทำให้ส่วนประกอบบางอย่างในชุดอุปกรณ์ทำงานล้มเหลว

คำแนะนำ: ซื้อชุดสกัด DNA จีโนมพืชชุดใหม่สำหรับการดำเนินการที่เกี่ยวข้อง

6. การใช้ชุดอุปกรณ์อย่างไม่เหมาะสม

คำแนะนำ: ซื้อชุดแยก DNA ของพืชสำหรับตัวอย่างเพื่อการสกัดและทำให้บริสุทธิ์ของ DNA จีโนมของพืช

7. Buffer WB โดยไม่ต้องเพิ่ม aไม่มีน้ำ เอทานอล

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer WB

8. ไม่ได้หยดสารชะลงบนเมมเบรนซิลิกาอย่างถูกต้อง

คำแนะนำ: เติมสารให้ความร้อนล่วงหน้าที่ 65℃หยดลงไปตรงกลางเมมเบรนของซิลิกาเจล แล้วทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ

การสกัดเพื่อให้ได้ DNA จีโนมที่ให้ผลผลิตต่ำ

1. ตัวอย่างถูกจัดเก็บอย่างไม่เหมาะสมหรือเก็บไว้นานเกินไป ส่งผลให้จีโนมดีเอ็นเอเสื่อมสภาพ

คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อที่อุณหภูมิ -20℃;พยายามใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อที่เก็บใหม่สำหรับการสกัด DNA ของจีโนม

2. หากจำนวนตัวอย่างเนื้อเยื่อน้อยเกินไป DNA ของจีโนมที่สกัดได้จะน้อยลง

คำแนะนำ: ตัวอย่างพืชบางชนิดมีน้ำมาก เช่น พืชน้ำ เช่น สาหร่าย ฯลฯ สามารถเพิ่มปริมาณได้อย่างเหมาะสมหรือทำให้น้ำขาดน้ำเล็กน้อยก่อนการผ่าตัด

3. ตัวอย่างไม่ได้บดด้วยไนโตรเจนเหลวอย่างละเอียด หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องนานเกินไปหลังการบด

คำแนะนำ: การบดไนโตรเจนเหลวต้องเพียงพอ และควรทำลายผนังเซลล์ตัวอย่างให้มากที่สุดทันทีหลังจากการบด ควรย้ายผงตัวอย่างไปที่ 65℃อุ่นบัฟเฟอร์ PL1 สำหรับขั้นตอนต่อไป

4. ไม่ใช้ชุดที่ถูกต้อง

คำแนะนำ: ใช้ชุดแยก DNA ของพืชโดยเฉพาะเพื่อสกัดและทำให้ DNA จีโนมของพืชบริสุทธิ์

5. การจัดเก็บ Foregene Protease ที่ไม่เหมาะสมส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน

คำแนะนำ: ยืนยันสภาวะการเก็บรักษา Foregene Protease หรือแทนที่ด้วย Foregene Protease ใหม่สำหรับการย่อยด้วยเอนไซม์

6. ปัญหาการชะล้าง

คำแนะนำ: โปรดใช้ Buffer EB เพื่อชะล้าง;ถ้าใช้ ddH₂O หรือสารชะอื่นๆ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าค่า pH ของสารชะอยู่ระหว่าง 7.0-8.5

7. หยดน้ำยาไม่ถูกวิธี

คำแนะนำ: โปรดหยดสารละลายลงไปตรงกลางของซิลิกาเมมเบรนและทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ

8. ปริมาณสารชะมีขนาดเล็กเกินไป

คำแนะนำ: โปรดใช้ eluent สำหรับ genomic DNA elution ตามคำแนะนำ อย่างน้อยต้องไม่ต่ำกว่า 100ไมโครลิตร.

สกัด DNA จีโนมที่มีความบริสุทธิ์ต่ำ

ความบริสุทธิ์ต่ำของ DNA จีโนมจะนำไปสู่ความล้มเหลวหรือผลลัพธ์ที่ไม่ดีของการทดลองขั้นปลาย เช่น: ไม่สามารถตัดเอ็นไซม์ได้ และ PCR ไม่สามารถรับชิ้นส่วนของยีนเป้าหมายได้

1. การปนเปื้อนของโปรตีนเบ็ดเตล็ด การปนเปื้อนของ RNA

การวิเคราะห์: ไม่ได้ใช้บัฟเฟอร์ PW เพื่อล้างคอลัมน์ไม่ได้ใช้บัฟเฟอร์ PW เพื่อล้างคอลัมน์ด้วยความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ถูกต้อง

คำแนะนำ: พยายามตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีการตกตะกอนใน supernatant เมื่อ supernatant ผ่านคอลัมน์ต้องแน่ใจว่าได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ด้วย Buffer PW ตามคำแนะนำ และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้

2. มลพิษไอออนสิ่งเจือปน

การวิเคราะห์: คอลัมน์ล้างบัฟเฟอร์ WB ถูกละเว้นหรือล้างเพียงครั้งเดียว ส่งผลให้เกิดการปนเปื้อนของไอออนิกตกค้าง

คำแนะนำ: อย่าลืมล้างสองครั้งด้วย Buffer WB ตามคำแนะนำเพื่อกำจัดไอออนที่ตกค้างให้ได้มากที่สุด

3. การปนเปื้อนของ RNase

การวิเคราะห์: เพิ่ม RNase ภายนอกลงในบัฟเฟอร์การดำเนินการล้างที่ไม่ถูกต้องใน Buffer PW จะส่งผลให้ RNase ตกค้างและส่งผลต่อการดำเนินการทดลอง RNA ปลายทาง เช่น การถอดรหัสในหลอดทดลอง

คำแนะนำ: ชุดสกัดกรดนิวคลีอิกซีรีส์ Foregene สามารถกำจัด RNA โดยไม่ต้องมี RNase เพิ่มเติม และรีเอเจนต์ทั้งหมดในชุดแยก DNA ของพืชไม่ต้องการ RNaseต้องแน่ใจว่าได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ด้วย Buffer PW ตามคำแนะนำ และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้

4. เอทานอลตกค้าง

การวิเคราะห์: หลังจากล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ด้วย Buffer WB จะไม่มีการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่า

คำแนะนำ: ปฏิบัติตามคำแนะนำสำหรับการปั่นแยกหลอดเปล่าที่เหมาะสม

คู่มือการใช้งาน:

คู่มือการใช้งานชุดตรวจแยกดีเอ็นเอพืช