PCR แบบเรียลไทม์ Easyᵀᴹ-Taqman
คำอธิบายชุด:
◮Simple—2× PCR Mix เพื่อลดข้อผิดพลาดในการทดลองและเวลาในการทำงาน
◮เฉพาะ - บัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสมและเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนสามารถป้องกันการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงและการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์
◮ความไวสูง—สามารถตรวจหาแม่แบบที่มีสำเนาต่ำได้
◮ความสามารถรอบด้านที่ดี เข้ากันได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณตามเวลาจริงส่วนใหญ่
คำอธิบายชุด
2X Real PCR ง่ายTMMix-Taqman จัดทำโดย Real Time PCR EasyTM-Taqman kit เป็นระบบพรีมิกซ์ใหม่ที่ใช้โพรบเรืองแสงเฉพาะสำหรับปฏิกิริยาการขยายสัญญาณ PCR แบบเรียลไทม์ ซึ่งสามารถปรับปรุงความจำเพาะของผลิตภัณฑ์และความไวต่อปฏิกิริยาได้อย่างมากROX ถูกจัดให้เป็นสีย้อมควบคุมภายใน
2X Real PCR ง่ายTMMix-Taqman ประกอบด้วย Taq DNA Polymerase แบบสตาร์ทร้อนที่ไม่เหมือนใครของ Foregeneเมื่อเปรียบเทียบกับเอ็นไซม์ Taq ทั่วไป มันมีข้อดีของประสิทธิภาพการขยายสูง ความสามารถในการขยายเฉพาะที่แข็งแกร่ง และอัตราการไม่ตรงกันต่ำสามารถลดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงและปรับปรุงความแม่นยำของ PCR
ข้อมูลจำเพาะ
| PCR แบบเรียลไทม์ง่ายTM-แท็คแมน | ||||
| องค์ประกอบชุด (ระบบ20μl) | คิวพี-01021 | คิวพี-01022 | คิวพี-01023 | คิวพี-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×PCR จริงง่ายTMผสม-แท็คแมน | 1 มล. ×2 | 1.7 มล. ×3 | 1.7 มล. ×6 | 1.7 มล. ×12 |
| 20×ROX อ้างอิงสีย้อม | 200 มล | 0.5ml | 1 มล | 1 มล. × 2 |
| ddH ที่ปราศจาก DNase2O | 1.7 มล | 1.7 มล. ×2 | 10 มล | 20 มล |
| Iคำแนะนำ | 1 | 1 | 1 | 1 |
คุณสมบัติและข้อดี
■ Simple—2X PCR Mix เพื่อลดข้อผิดพลาดในการทดลองและเวลาในการทำงาน
■ เฉพาะ - บัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสมและเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนสามารถป้องกันการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงและการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์
■ ความไวสูง—สามารถตรวจหาแม่แบบที่มีสำเนาต่ำได้
■ ความสามารถรอบด้านที่ดี—เข้ากันได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณตามเวลาจริงส่วนใหญ่
แอปพลิเคชันชุด
การวิเคราะห์ qPCR
เวิร์กโฟลว์
กราฟฟิค
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
ควรเก็บชุดนี้ไว้ให้ห่างจากแสง และควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°Cหากใช้บ่อย สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C เป็นระยะเวลาสั้นๆ (10 วัน)
ไม่มีการขยายสัญญาณ
1.Taq DNA Polymerase ในชุดอุปกรณ์สูญเสียการทำงานเนื่องจากการจัดเก็บที่ไม่เหมาะสมหรือการหมดอายุของชุดอุปกรณ์
คำแนะนำ: ตรวจสอบเงื่อนไขการจัดเก็บของชุด;เพิ่ม Taq DNA Polymerase ในปริมาณที่เหมาะสมอีกครั้งในระบบ PCR หรือซื้อชุด Real Time PCR ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง
2. มีสารยับยั้ง Taq DNA Polymerase จำนวนมากในแม่แบบ DNA
คำแนะนำ: ทำแม่แบบใหม่หรือลดปริมาณแม่แบบที่ใช้
3.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ 2× Real PCR Mix ที่เรามีคือ 3.5mMอย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม
5.จำนวนแม่แบบน้อยหรือมากเกินไป
คำแนะนำ: ดำเนินการเจือจางการไล่ระดับสีแบบเชิงเส้นของแม่แบบ และเลือกความเข้มข้นของแม่แบบที่มีเอฟเฟกต์ PCR ที่ดีที่สุดสำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
กทช.มีค่าการเรืองแสงสูงเกินไป
1. การปนเปื้อนของน้ำยาที่เกิดขึ้นระหว่างการทำงาน
คำแนะนำ: แทนที่ด้วยรีเอเจนต์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
2.เกิดการปนเปื้อนระหว่างการเตรียมระบบปฏิกิริยา PCR
คำแนะนำ: ใช้มาตรการป้องกันที่จำเป็นระหว่างการทำงาน เช่น สวมถุงมือยาง ใช้ปลายปิเปตกับตัวกรอง ฯลฯ
3.ไพรเมอร์ถูกลดคุณภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะทำให้เกิดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
Primer dimer หรือการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง
1.ความเข้มข้นของ Mg2+ ไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ความเข้มข้น Mg2+ ของ Real PCR EasyTM Mix 2x ที่เรามีให้คือ 3.5 มิลลิโมลาร์อย่างไรก็ตาม สำหรับไพรเมอร์และแม่แบบพิเศษบางชนิด ความเข้มข้นของ Mg2+ อาจสูงกว่านี้ดังนั้น คุณสามารถเพิ่ม MgCl2 ได้โดยตรงเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความเข้มข้นของ Mg2+แนะนำให้เพิ่ม Mg2+ 0.5mM ทุกครั้งเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
2. อุณหภูมิการหลอม PCR ต่ำเกินไป
คำแนะนำ: เพิ่มอุณหภูมิการหลอม PCR ครั้งละ 1 ℃ หรือ 2 ℃
3.ผลิตภัณฑ์ PCR ยาวเกินไป
คำแนะนำ: ความยาวของผลิตภัณฑ์ Real Time PCR ควรอยู่ระหว่าง 100-150bp ไม่เกิน 500bp
4.ไพรเมอร์จะเสื่อมสภาพ และการเสื่อมสภาพของไพรเมอร์จะนำไปสู่การขยายลักษณะเฉพาะ
คำแนะนำ: ใช้ SDS-PAGE อิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อตรวจสอบว่าไพรเมอร์เสื่อมสภาพหรือไม่ และแทนที่ด้วยไพรเมอร์ใหม่สำหรับการทดลอง PCR แบบเรียลไทม์
5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง
ความสามารถในการทำซ้ำของค่าเชิงปริมาณไม่ดี
1. เครื่องทำงานผิดปกติ
คำแนะนำ: อาจมีข้อผิดพลาดระหว่างรู PCR แต่ละรูของเครื่องมือ ส่งผลให้ความสามารถในการทำซ้ำไม่ดีในระหว่างการจัดการหรือการตรวจจับอุณหภูมิโปรดตรวจสอบตามคำแนะนำของอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้อง
2. ความบริสุทธิ์ของตัวอย่างไม่ดี
คำแนะนำ: ตัวอย่างที่ไม่บริสุทธิ์จะทำให้การทดลองทำซ้ำได้ไม่ดี ซึ่งรวมถึงความบริสุทธิ์ของแม่แบบและไพรเมอร์เป็นการดีที่สุดที่จะชำระแม่แบบให้บริสุทธิ์อีกครั้ง และไพรเมอร์ควรทำให้บริสุทธิ์โดย SDS-PAGE
3.เวลาในการเตรียมระบบ PCR และการจัดเก็บนานเกินไป
ข้อแนะนำ: ใช้ระบบ Real Time PCR ในการทดลอง PCR ทันทีหลังการเตรียม และอย่าปล่อยทิ้งไว้นานเกินไป
4.เงื่อนไขการขยาย PCR ไม่เหมาะสม และลำดับไพรเมอร์หรือความเข้มข้นไม่เหมาะสม
คำแนะนำ: ยืนยันความถูกต้องของลำดับไพรเมอร์และไพรเมอร์ไม่ได้ลดลงหากสัญญาณขยายไม่ดี ให้ลองลดอุณหภูมิการหลอมลงและปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสม
5.ระบบ PCR ไม่เหมาะสม หรือระบบมีขนาดเล็กเกินไป
คำแนะนำ: ระบบปฏิกิริยา PCR มีขนาดเล็กเกินไปจะทำให้ความแม่นยำในการตรวจจับลดลงเป็นการดีที่สุดที่จะใช้ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำโดยเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเพื่อเรียกใช้การทดสอบ Real Time PCR อีกครั้ง
