(96 หลุม) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
คำอธิบาย
เดอะ(96 หลุม) ควิกอีซี่TM ชุดเซลล์โดยตรง RT-qPCR–SYBR กรีน Iจัดเตรียมให้ระบบบัฟเฟอร์ lysis เฉพาะto ปล่อย RNA อย่างรวดเร็วจากเซลล์เพาะเลี้ยงตัวอย่างสำหรับปฏิกิริยา RT-qPCR ช่วยลดเวลาและแรงงานกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ RNA และใช้เวลาเพียง 7 นาทีในการรับแม่แบบ RNA ที่ต้องการเดอะ5× ผสม RT โดยตรงและ2× โดยตรง qPCR Mix-SYBRที่ให้มาในกล่องได้อย่างรวดเร็วและรับเชิงปริมาณตามเวลาจริงได้อย่างมีประสิทธิภาพผลการตรวจพีซีอาร์
5× Direct RT Mix และ 2× Direct qPCR Mix-SYBR มีความทนทานต่อสารยับยั้งสูง และสามารถใช้ lysate ของตัวอย่างเพื่อทดสอบเป็นแม่แบบสำหรับการถอดความแบบย้อนกลับที่มีประสิทธิภาพและการขยายสัญญาณเฉพาะรีเอเจนต์ประกอบด้วย Reverse Transcriptase เฉพาะของ Foregene ที่มีความสัมพันธ์สูงสำหรับ RNA รวมถึง Hot D-Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา, ตัวเพิ่มประสิทธิภาพ PCR และความคงตัว และสามารถใช้ร่วมกับบัฟเฟอร์การสลายเพื่อตรวจจับตัวอย่างได้อย่างรวดเร็ว ง่ายดาย และแม่นยำ อีกทั้งยังมีลักษณะของความไวสูง ความจำเพาะสูง และเสถียรภาพที่ดี
ชุดนี้มุ่งเป้าไปที่การสลายระบบระดับจุลภาคของเซลล์เพาะเลี้ยง 96 หลุม และมีความสม่ำเสมอและความสม่ำเสมอที่ดีส่วนประกอบของชุดประกอบด้วยปฏิกิริยา lysis 96 ปฏิกิริยา ปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับ 96 ปฏิกิริยา และปฏิกิริยา 96×2 qPCR ซึ่งสามารถตอบสนองกับเพลตเซลล์ 96 หลุมสำหรับการใช้งานครั้งเดียว หลีกเลี่ยงมลพิษที่เกิดจากการเปิดซ้ำ การแช่แข็งและการละลายของรีเอเจนต์ และการเสื่อมประสิทธิภาพของรีเอเจนต์
ส่วนประกอบของชุด
| องค์ประกอบชุด ( 50 μระบบ L lysis/20 ไมโครลิตรRT ระบบปฏิกิริยา /20μระบบปฏิกิริยา L qPCR) | ดีอาร์ที-03011 | ข้อสังเกต | |
| 96T | |||
| ส่วนหนึ่งI | กันชนCL | 5 มล | เซลล์ไลซิส |
| ฟอร์เจนโปรตีเอส พลัส II | 100 μL | ||
| กันชนST | 500 μL | ||
| ส่วนหนึ่ง II | ดีเอ็นเอยางลบ | 100 μL | |
| 5× ผสม RT โดยตรง | 400 μL | RT | |
| 2× ผสม qPCR โดยตรง-SYBR | 1 มL × 2 | คิวพีซีอาร์ | |
| 50× ROX สีย้อมอ้างอิง | 400ไมโครลิตร | ||
| อาร์เนส- ฟรีวว2 O | 1.7มล |
| |
| Mรายปี | 1 ชิ้นส่วน | 1 เสิร์ฟ | |
*: DNA Eraser ของรีเอเจนต์การสลายจะรวมอยู่ในส่วนที่ II ของชุดอุปกรณ์ส่วนประกอบ Cell Lysis, RT และ qPCR สามารถซื้อแยกต่างหากได้
คุณสมบัติและข้อดี
■ง่ายและมีประสิทธิภาพ: ด้วยเทคโนโลยี Cell Direct RT สามารถรับตัวอย่าง RNA ได้ในเวลาเพียง 7 นาที
■ ความต้องการตัวอย่างมีขนาดเล็ก สามารถทดสอบได้ต่ำถึง 10 เซลล์
■ ปริมาณงานสูง: สามารถตรวจจับ RNA ได้อย่างรวดเร็วในเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในเพลต 384, 96, 24, 12, 6 หลุม
■ DNA Eraser สามารถลบจีโนมที่ปล่อยออกมาได้อย่างรวดเร็ว ลดผลกระทบอย่างมากต่อผลการทดลองที่ตามมา
■ ระบบ RT และ qPCR ที่ปรับให้เหมาะสมทำให้การถอดความย้อนกลับ RT-PCR สองขั้นตอนมีประสิทธิภาพมากขึ้น และ PCR เฉพาะเจาะจงมากขึ้น และทนทานต่อสารยับยั้งปฏิกิริยา RT-qPCR มากขึ้น
แอปพลิเคชันชุด
ขอบเขตการใช้งาน: เซลล์เพาะเลี้ยง
- RNA ที่ปล่อยออกมาโดยการสลายตัวอย่าง: ใช้ได้กับเทมเพลต RT-qPCR ของชุดนี้เท่านั้น
- ชุดนี้สามารถใช้เพื่อวัตถุประสงค์ดังต่อไปนี้: การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน การตรวจสอบผลการทำให้เงียบของยีนที่ใช้ siRNA สื่อกลาง การคัดกรองยา ฯลฯ
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
ส่วน I ของชุดนี้ควรเก็บไว้ที่ 4℃;ส่วนที่สองควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 ℃
Foregene Protease Plus II ควรเก็บไว้ที่ 4℃ ห้ามแช่แข็งที่ -20 ℃
น้ำยา2×Direct qPCR Mix-Taqman ควรเก็บไว้ที่ -20℃ในที่มืด;หากใช้บ่อยก็เก็บได้นานเช่นกัน 4℃ สำหรับการจัดเก็บระยะสั้น (ใช้ให้หมดภายใน 10 วัน)
หลักการออกแบบไพรเมอร์แบบเรียลไทม์ PCR
ไพรเมอร์ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ย้อนกลับ
สำหรับ Real Time PCR การออกแบบไพรเมอร์มีความสำคัญมากไพรเมอร์เกี่ยวข้องกับความจำเพาะและประสิทธิภาพของการขยาย PCR และสามารถออกแบบโดยอ้างอิงถึงหลักการต่อไปนี้:
- ความยาวรองพื้น: 18-30bp.
- เนื้อหา GC: 40-60%
- ค่า Tm: ซอฟต์แวร์ออกแบบ Primer เช่น Primer 5 สามารถให้ค่า Tm ของ Primer ได้ค่า Tm ของไพรเมอร์อัพสตรีมและดาวน์สตรีมควรใกล้เคียงกันมากที่สุดนอกจากนี้ยังสามารถใช้สูตรการคำนวณ Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T)เมื่อดำเนินการ PCR โดยทั่วไปจะเลือกอุณหภูมิที่ต่ำกว่าค่าไพรเมอร์ Tm ที่ 5 °C เป็นอุณหภูมิการหลอม (การเพิ่มอุณหภูมิการหลอมที่สอดคล้องกันสามารถเพิ่มความจำเพาะของปฏิกิริยา PCR)
- ผลิตภัณฑ์รองพื้นและ PCR:
- การออกแบบไพรเมอร์ PCR ความยาวของผลิตภัณฑ์ขยายควรอยู่ที่ 100-150bp
- ไพรเมอร์การออกแบบในพื้นที่โครงสร้างรองของแม่แบบควรหลีกเลี่ยงให้มากที่สุด
- หลีกเลี่ยงการก่อตัวของฐานเสริม 2 ฐานขึ้นไประหว่างปลาย 3 ′ของไพรเมอร์ต้นน้ำและปลายน้ำ
- ฐานเทอร์มินัล Primer 3 'ไม่สามารถมี G หรือ C ติดต่อกันได้อีก 3 อัน
- ไพรเมอร์เองไม่สามารถมีโครงสร้างเสริมกันได้ มิฉะนั้น จะเกิดโครงสร้างกิ๊บซึ่งส่งผลต่อการขยาย PCR
- ควรกระจาย ATCG ให้เท่า ๆ กันในลำดับไพรเมอร์และควรหลีกเลี่ยงฐานเทอร์มินัล 3 'เป็น T
ภาคผนวก1：คell โดยตรงRT-qPCR ชุดส่วนประกอบt แพ็คเสริม
1. โซลูชั่นสลายเซลล์
| โซลูชั่นสลายเซลล์ | |||
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบสลาย 24 หลุม / หลุม) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ต | 500 ต | ||
| ส่วนหนึ่งฉัน | บัฟเฟอร์ CL | 20 มล | 100 มล |
| ฟอร์จีน โปรตีเอส พลัส II | 400 มล | 1 มล. × 2 | |
| บัฟเฟอร์ ST | 1 มล. × 2 | 10 มล | |
| ส่วนหนึ่งครั้งที่สอง | ยางลบดีเอ็นเอ | 400 มล | 1 มล. × 2 |
| อาร์ทีมิกซ์ | |
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตร) | DRT-01011-B1 |
| 200 ต | |
| 5× ผสม RT โดยตรง | 800 มล |
| RNase ฟรี ddH2O | 1.7 มล. × 2 |
| คิวพีซีอาร์มิกซ์ | ||
| ส่วนประกอบของชุด (ระบบปฏิกิริยา 20 ไมโครลิตร) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ต | 1,000 ต | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 มล. × 2 | 1.7 มล. × 6 |
| 20× ROX สีย้อมอ้างอิง | 40 มล | 200 มล |
| RNase ฟรี ddH2O | 1.7 มล | 10 มล |
คู่มือการใช้งาน:
