แนวทางการวิเคราะห์ปัญหา

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

ไม่สามารถสกัด RNA ได้หรือผลผลิตของกรดนิวคลีอิกต่ำ

โดยปกติแล้วมีหลายปัจจัยที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการกู้คืน เช่น เนื้อหา RNA ตัวอย่าง วิธีการดำเนินการ ปริมาณการชะล้าง เป็นต้น。

การวิเคราะห์สาเหตุทั่วไป：

1. อ่างน้ำแข็งหรือการหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ (4 ° C) ระหว่างการทำงาน

คำแนะนำ: การทำงานที่อุณหภูมิห้อง (15-25 ° C) ห้ามแช่น้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิต่ำ

2. การเก็บตัวอย่างที่ไม่เหมาะสมหรือเก็บตัวอย่างไว้นานเกินไป

คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างที่อุณหภูมิ -80 °C หรือแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และหลีกเลี่ยงการใช้น้ำแข็งละลายซ้ำๆพยายามใช้ตัวอย่างที่เก็บใหม่สำหรับการสกัด RNA

3. การสลายตัวอย่างไม่เพียงพอ

คำแนะนำ: โปรดตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ผสมตัวอย่างและสารละลายทำงาน (ลิเนียร์อะคริลาไมด์) อย่างทั่วถึงและบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (15-25 ° C)

4.เติมสารชะล้างไม่ถูกต้อง

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เพิ่ม ddH2O ที่ปราศจาก RNase ที่กึ่งกลางของเมมเบรนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์

5.ปริมาณแอนไฮดรัสเอทานอลในบัฟเฟอร์ viRW2 ที่ไม่เหมาะสม

คำแนะนำ: โปรดปฏิบัติตามคำแนะนำ เติมเอทานอลปราศจากน้ำในปริมาณที่ถูกต้องลงใน Buffer viRW2 และผสมให้เข้ากันก่อนใช้ชุด。

6. การใช้ตัวอย่างที่ไม่เหมาะสม

คำแนะนำ: ตัวอย่าง 200µl ต่อ 500µl ของ Buffer viRLปริมาณตัวอย่างที่มากเกินไปจะส่งผลให้อัตราการสกัด RNA ลดลง

7.ปริมาณการชะที่ไม่เหมาะสมหรือการชะที่ไม่สมบูรณ์

คำแนะนำ: ปริมาตรชะล้างของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์คือ 30-50μl;หากผลการชะไม่เป็นที่พอใจ แนะนำให้เติม RNase-Free ddH ที่อุ่นไว้ล่วงหน้า₂O และยืดเวลาการวางที่อุณหภูมิห้อง เช่น 5-10 นาที

8.คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์มีเอธานอลตกค้างหลังจากล้างใน Buffer viRW2

คำแนะนำ: หากเอทานอลยังคงอยู่หลังจากล้างใน Buffer viRW2 และการปั่นแยกด้วยหลอดเปล่าเป็นเวลา 2 นาที คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สามารถทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากการปั่นแยกด้วยหลอดเปล่าเพื่อกำจัดเอทานอลที่เหลืออยู่ให้หมด

การสลายตัวของโมเลกุล RNA ที่บริสุทธิ์

คุณภาพของ RNA ที่บริสุทธิ์เกี่ยวข้องกับปัจจัยต่างๆ เช่น การเก็บตัวอย่าง การปนเปื้อนของ RNase และการทำงาน

การวิเคราะห์สาเหตุทั่วไป：

1.เก็บตัวอย่างไม่ทันเวลา

คำแนะนำ: หากตัวอย่างไม่ได้ใช้หลังการเก็บ โปรดเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80 ℃ หรือไนโตรเจนเหลวทันทีสำหรับการสกัดโมเลกุล RNA พยายามใช้ตัวอย่างที่เก็บมาใหม่ทุกครั้งที่ทำได้

2. เก็บตัวอย่างแช่แข็งและละลายซ้ำ

คำแนะนำ: หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำ (ไม่เกิน 1 ครั้ง) ระหว่างการเก็บตัวอย่างและการเก็บรักษา มิฉะนั้น ผลผลิตของกรดนิวคลีอิกจะลดลง

3.RNase ถูกนำมาใช้ในห้องผ่าตัดหรือไม่มีการสวมถุงมือ หน้ากาก ฯลฯ แบบใช้แล้วทิ้ง

คำแนะนำ: การทดลองสกัดโมเลกุล RNA ทำได้ดีที่สุดในห้องผ่าตัด RNA ที่แยกจากกัน และทำความสะอาดโต๊ะทดลองก่อนการทดลองสวมถุงมือและหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้งในระหว่างการทดลองเพื่อหลีกเลี่ยงการย่อยสลาย RNA ที่เกิดจากการนำ RNase

4. น้ำยาถูกปนเปื้อนโดย RNase ระหว่างการใช้งาน

คำแนะนำ: แทนที่ด้วย Viral RNA Isolation Kit ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง

5.การปนเปื้อน RNase ของท่อปั่นแยก ทิปปิเปต ฯลฯ คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าท่อปั่นแยก ทิปปิเปต และปิเปตทั้งหมดปลอดสาร RNase

โมเลกุล RNA ที่บริสุทธิ์ส่งผลต่อการทดลองขั้นปลาย

โมเลกุล RNA ที่ทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จะส่งผลต่อการทดลองขั้นปลายหากมีไอออนของเกลือหรือโปรตีนมากเกินไป เช่น: การถอดความแบบย้อนกลับ, Northern Blot เป็นต้น。

1. มีเกลือไอออนเหลืออยู่ในโมเลกุล RNA ที่ถูกชะออก

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เติมเอธานอลปราศจากน้ำในปริมาตรที่ถูกต้องใน Buffer viRW2 แล้ว และล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สองครั้งตามความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ถูกต้องในคู่มือการใช้งาน ถ้ายังมีเกลือไอออนเหลืออยู่ คุณสามารถเพิ่ม Buffer viRW2 ลงในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีจากนั้นทำการปั่นแยกเพื่อขจัดการปนเปื้อนของไอออนเกลือออกให้มากที่สุด

2. มีเอธานอลเหลืออยู่ในโมเลกุล RNA ที่ถูกชะออก

คำแนะนำ: เมื่อยืนยันว่าคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ได้รับการล้างด้วย Buffer viRW2 แล้ว ให้ทำการปั่นเหวี่ยงท่อเปล่าตามความเร็วการหมุนเหวี่ยงในคู่มือการใช้งานหากยังมีเอทานอลเหลืออยู่ สามารถทิ้งไว้ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องหลังจากการปั่นแยกด้วยหลอดเปล่าเพื่อกำจัดเอทานอลที่เหลืออยู่ให้ได้มากที่สุด

คู่มือการใช้งาน:

คู่มือการใช้งานชุดแยก Viral RNA