อัตราส่วนที่ต่ำของ A260/A230 มักเกิดจากสิ่งเจือปนที่มีความยาวคลื่นการดูดซับสูงสุดที่ 230 นาโนเมตรมาดูกันว่าสิ่งเจือปนเหล่านี้ประกอบด้วยอะไรบ้าง:

• สารมลพิษทั่วไป	ความยาวคลื่นการดูดซึม	เอฟเฟกต์อัตราส่วน
  โปรตีน	~230nm และ 280nm	ลดพร้อมกันของก260/A 280และ ก260/A 280อัตราส่วน
  เกลือกัวนิดีน	220-240 นาโนเมตร	ลด ก260/A 280อัตราส่วน
  ฟีนอล	~270นาโนเมตร	-
  ไตรซอล	~230nm และ 270nm	ลด ก260/A 280อัตราส่วน
  กพท	~230นาโนเมตร	ลด ก260/A 280อัตราส่วน
  เอทานอล	230-240นาโนเมตร	ลด ก260/A 280อัตราส่วน

 
 
 
ความยาวคลื่นการดูดซึมและค่าคอนทราสต์ของสารมลพิษทั่วไป

Pการปนเปื้อนของโรทีน
มลพิษทางโปรตีนถือได้ว่าเป็นมลพิษที่พบมากที่สุดในกระบวนการสกัดกรดนิวคลีอิกโปรตีนอยู่ระหว่างเฟสน้ำด้านบนและด้านล่างโดยธรรมชาติเฟสมลพิษจะลดอัตราส่วนของ A260/A280 และ A260/A230 ในเวลาเดียวกัน และอัตราส่วนของ A260/A230 จะเปลี่ยนแปลงชัดเจนกว่าอัตราส่วนของ A260/A280
ในช่วงต่อมาการถอดความแบบย้อนกลับor ปฏิกิริยา qPCR, โปรตีนตกค้างสามารถยับยั้งหรือรบกวนการทำงานของเอนไซม์.วิธีที่ดีที่สุดในการหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของโปรตีนคือการคำนึงถึงหลักการ "ค่อนข้างน้อยกว่ามาก แต่ปริมาณเล็กน้อยหลายๆ ครั้ง" เมื่อทำการดูดสารส่วนเกิน

2. มลพิษของกัวนิดีเนียม
ไฮโดรคลอไรด์ (GuHCl) และ guanidine thiocyanate (GTC) มีผลในการทำลายโปรตีน ซึ่งสามารถทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ได้อย่างรวดเร็วในระหว่างกระบวนการสกัดกรดนิวคลีอิก ทำให้เกิดการเสียสภาพของโปรตีนและการตกตะกอนความยาวคลื่นการดูดซับของ GuHCl และ GTC อยู่ระหว่าง 220-240 นาโนเมตร และเกลือกัวนิดินเนียมที่ตกค้างจะลดอัตราส่วนของ A260/A230.แม้ว่าเกลือกัวนิดีเนียมที่ตกค้างจะลดอัตราส่วนลงผลกระทบต่อการทดลองปลายน้ำนั้นเล็กน้อยมาก.

3. การปนเปื้อนของไตรซอล
ส่วนประกอบหลักของ Trizol คือฟีนอลหน้าที่หลักของฟีนอลคือการแยกเซลล์และปล่อยโปรตีนและสารกรดนิวคลีอิกในเซลล์แม้ว่าฟีนอลสามารถทำลายโปรตีนได้อย่างมีประสิทธิภาพ แต่ก็ไม่สามารถยับยั้งการทำงานของ RNase ได้อย่างสมบูรณ์ดังนั้น 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β- mercaptoethanol ฯลฯ จึงถูกเติมลงใน TRIzol เพื่อยับยั้ง RNase ภายนอกและภายนอก
เมื่อสกัด RNA ของเซลล์ Trizol สามารถแยกเซลล์ได้อย่างรวดเร็วและยับยั้ง nuclease ที่ปล่อยออกมาจากเซลล์ และ Trizol ที่ตกค้างจะลดอัตราส่วนของ A260/A230 ลงอย่างมาก
วิธีดำเนินการ: เมื่อทำการปั่นเหวี่ยง จะต้องสังเกตว่าฟีนอลใน Trizol ละลายได้ง่ายในเฟสน้ำภายใต้สภาวะ 4° และอุณหภูมิห้อง

4. เอทานอลตกค้าง
เอทานอลใช้ในกระบวนการขั้นสุดท้ายเพื่อทำให้ DNA ตกตะกอนในขณะที่ละลายไอออนของเกลือที่อาจจับกับ DNAความยาวคลื่นการดูดกลืนแสงสูงสุดการดูดซึมสูงสุดของเอทานอลอยู่ที่ 230-240 นาโนเมตรอีกด้วย ซึ่งจะลดอัตราส่วนของ A260/A230 ด้วย.
วิธีการหลีกเลี่ยงการตกค้างของเอทานอลสามารถทำซ้ำได้สองครั้งในระหว่างการชะล้างขั้นสุดท้าย โดยเป่าเข้าไปตู้ดูดควันเป็นเวลาสองนาทีเพื่อให้เอทานอลระเหยออกจนหมดก่อนเติมบัฟเฟอร์สำหรับชะ
อย่างไรก็ตาม ควรทราบว่าอัตราส่วนดังกล่าวเป็นเพียงดัชนีประเมินคุณภาพของ RNA เท่านั้นหากการดำเนินการดังกล่าวข้างต้นได้รับการควบคุมอย่างเข้มงวด ค่าเบี่ยงเบนระหว่างอัตราส่วนและช่วงมาตรฐานจะไม่ส่งผลกระทบอย่างมากต่อการทดลองขั้นปลาย
สินค้าที่เกี่ยวข้อง:
ชุดแยก RNA ของสัตว์ทั้งหมด
ชุดแยก RNA ของพืชทั้งหมด
ชุดแยก RNA ของเซลล์ทั้งหมด
ชุดแยก RNA ของพืชรวม