ชุดแยก DNA จาก Buccal Swab/FTA Card การสกัด Genomic DNA หรือการทำให้บริสุทธิ์จาก Buccal Swabs
คำอธิบายชุด:
ทำให้จีโนม DNA คุณภาพสูงบริสุทธิ์อย่างรวดเร็วจากตัวอย่างจากกระพุ้งแก้ม/การ์ด FTA
◮ไม่มีการปนเปื้อนของ RNase:คอลัมน์ DNA-Only ที่จัดทำโดยชุดทำให้สามารถลบ RNA ออกจาก DNA ของจีโนมโดยไม่ต้องเพิ่ม RNase ในระหว่างการทดลอง ป้องกันไม่ให้ห้องปฏิบัติการถูกปนเปื้อนโดย RNase จากภายนอก
◮ความเร็วที่รวดเร็ว:Foregene Protease มีกิจกรรมที่สูงกว่าโปรตีเอสที่คล้ายคลึงกัน และย่อยตัวอย่างเนื้อเยื่อได้อย่างรวดเร็วการดำเนินการนั้นง่ายและสามารถดำเนินการสกัด DNA จีโนมให้เสร็จภายใน 20-80 นาที
◮สะดวก:การปั่นแยกจะดำเนินการที่อุณหภูมิห้อง และไม่จำเป็นต้องมีการหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ 4°C หรือการตกตะกอนของเอธานอลด้วยเอทานอล
◮ความปลอดภัย:ไม่จำเป็นต้องทำการสกัดสารอินทรีย์
◮คุณภาพสูง:DNA จีโนมที่สกัดออกมามีชิ้นส่วนขนาดใหญ่ ไม่มี RNA ไม่มี RNase และมีปริมาณไอออนต่ำมาก ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการของการทดลองต่างๆ ได้
◮ระบบไมโครอีลูชั่น:สามารถเพิ่มความเข้มข้นของ DNA จีโนม ซึ่งสะดวกสำหรับการตรวจจับหรือการทดลองที่ปลายน้ำ
คำอธิบาย
ชุดนี้ให้วิธีการที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วในการรับจีโนมดีเอ็นเอที่มีความเข้มข้นสูงจากกระพุ้งแก้มและบัตร FTA (จุดเลือด)โดยใช้บริษัทของเรา'คอลัมน์และสูตรการหมุนของเมมเบรนซิลิกาเฉพาะของ DNA ที่เป็นเอกลักษณ์เฉพาะของ DNA เมื่อรวมกับ Foregene Protease ทำให้สามารถสกัด DNA จีโนมที่มีความเข้มข้นสูงและมีคุณภาพสูงได้ภายใน 80 นาทีคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ขนาดเล็กที่ออกแบบมาเป็นพิเศษจับ DNA จีโนม และ DNA สามารถถูกชะออกได้ในปริมาณเล็กน้อย (15μl) ระบบชะเพื่อเพิ่มความเข้มข้นของ DNA จีโนมที่ได้รับ ซึ่งสะดวกสำหรับการตรวจจับหรือการทดลองที่ปลายน้ำชุดอุปกรณ์สามารถประมวลผลตัวอย่างได้ครั้งละหนึ่งตัวอย่างหรือมากกว่า และกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ไม่จำเป็นต้องสกัดสารอินทรีย์ เช่น ฟีนอล คลอโรฟอร์ม และการตกตะกอนของไอโซโพรพานอลหรือเอทานอลที่ใช้เวลานาน ทั้งยังดำเนินการได้ง่ายและประหยัดเวลา
ข้อมูลจำเพาะ
50 เตรียม
ส่วนประกอบของชุด
| บัฟเฟอร์ ST1 |
| บัฟเฟอร์ ST2 |
| อะคริลาไมด์เชิงเส้น |
| บัฟเฟอร์ PW |
| บัฟเฟอร์ WB |
| บัฟเฟอร์ EB |
| Foregene โปรตีเอส |
| คอลัมน์ DNA เท่านั้น |
| คำแนะนำ |
คุณสมบัติและข้อดี
-ไม่มีการปนเปื้อน RNase: คอลัมน์เฉพาะ DNA ที่จัดทำโดยชุดทำให้สามารถลบ RNA ออกจากจีโนม DNA โดยไม่ต้องเพิ่ม RNase ในระหว่างการทดลอง หลีกเลี่ยงไม่ให้ห้องปฏิบัติการถูกปนเปื้อนโดย RNase จากภายนอก
- ความเร็วที่รวดเร็ว: Foregene Protease มีกิจกรรมที่สูงกว่าโปรตีเอสที่คล้ายกัน ย่อยตัวอย่างได้อย่างรวดเร็วใช้งานง่าย
- สะดวก: การหมุนเหวี่ยงจะดำเนินการที่อุณหภูมิห้อง และไม่จำเป็นต้องมีการหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ 4°C หรือการตกตะกอนของเอธานอลด้วยเอทานอล
- ความปลอดภัย: ไม่จำเป็นต้องทำการสกัดสารอินทรีย์
- คุณภาพสูง: DNA จีโนมที่สกัดออกมามีชิ้นส่วนขนาดใหญ่ ไม่มี RNA ไม่มี RNase และมีปริมาณไอออนต่ำมาก ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการของการทดลองต่างๆ
- ระบบ Micro-elution: สามารถเพิ่มความเข้มข้นของจีโนม DNA ซึ่งสะดวกสำหรับการตรวจจับหรือการทดลองที่ปลายน้ำ
แอปพลิเคชันชุด
เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์จีโนม DNA จากตัวอย่างต่อไปนี้: buccal swabs, FTA Card (คราบเลือด)
การจัดเก็บและอายุการเก็บรักษา
-ชุดนี้สามารถเก็บไว้ได้นาน 12 เดือนภายใต้สภาวะแห้งที่อุณหภูมิห้อง (15-25°C)หากต้องการเก็บไว้เป็นระยะเวลานาน สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C
หมายเหตุ: หากเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำ สารละลายมีแนวโน้มที่จะตกตะกอนก่อนใช้งาน ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้วางสารละลายในชุดไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นระยะเวลาหนึ่งหากจำเป็น ให้อุ่นเครื่องในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้ตะกอนละลาย และผสมก่อนใช้
- สารละลาย Foregene Protease มีสูตรเฉพาะ ซึ่งจะออกฤทธิ์เมื่อเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลานาน (3 เดือน)กิจกรรมและความเสถียรจะดีขึ้นเมื่อเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C ดังนั้น ขอแนะนำให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C อย่าลืมเก็บที่อุณหภูมิ -20°C
คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์อุดตัน
ในชุดนี้ ในการดำเนินการสกัด DNA จีโนม คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จะถูกดูดซับโดยตรงบนส่วนผสมของการสลายด้วยเอนไซม์ของตัวอย่างโดยไม่มีขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง และคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์อาจถูกบล็อกเนื่องจากเอนไซม์ที่ไม่สมบูรณ์และความหนืดสูงของตัวอย่าง
สาเหตุที่เป็นไปได้ดังต่อไปนี้:
1. การย่อยตัวอย่างเนื้อเยื่อด้วยเอนไซม์ไม่สมบูรณ์
คำแนะนำ: เวลาในการประมวลผลตัวอย่างของ Foregene Protease สามารถขยายได้อย่างเหมาะสม หรือสามารถเก็บส่วนเกินหลังจากการปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาที (~13,400 × g) เป็นเวลา 5 นาที
2. การใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเนื้อเยื่อขนาดใหญ่มากเกินไป
คำแนะนำ: ไม่ควรเกิน 1 Buccal swab ในตัวอย่าง;ถ้าตัวอย่างมีขนาดใหญ่เกินไป ให้เพิ่มปริมาณของ Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ตามลำดับ
3. ความหนืดของตัวอย่างสูงเกินไป
คำแนะนำ: ตัวอย่างสามารถเจือจางอย่างเหมาะสมด้วย Tris-HCl 10 mM ก่อนการสกัด DNA ของจีโนม
4. เศษของการ์ดเลือดถูกดูด
คำแนะนำ: เวลาหมุนเหวี่ยงชั่วคราวของขั้นตอนที่ 6 ของการสกัดจีโนมจุดเลือด (FTA Card) สามารถขยายได้อย่างเหมาะสม
ผลผลิตต่ำหรือไม่มี DNA
มักจะมีปัจจัยหลายอย่างที่ส่งผลต่อผลผลิตจีโนมดีเอ็นเอ รวมถึงแหล่งกำเนิดตัวอย่าง สภาวะการเก็บตัวอย่าง การเตรียมตัวอย่าง การจัดการ ฯลฯ
ไม่สามารถรับ DNA ของจีโนมได้ในระหว่างการสกัด
สาเหตุที่เป็นไปได้มีดังนี้:
1. การเก็บรักษาตัวอย่างหรือการเก็บรักษาที่ไม่เหมาะสมเป็นเวลานานเกินไปนำไปสู่การย่อยสลายดีเอ็นเอของจีโนม
คำแนะนำ: ควรเก็บตัวอย่างจาก Oral Swab ใหม่ๆ และไม่แนะนำให้ใช้ Swab ที่เก็บรักษาไว้สำหรับการดำเนินการสกัด DNA ของจีโนมตัวอย่างจุดเลือดควรตรวจสอบให้มีคุณภาพและระยะเวลาการเก็บไม่ควรนานเกินไป
2. การใช้เนื้อเยื่อน้อยเกินไปอาจส่งผลให้ไม่มีการสกัดจีโนมดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้อง
คำแนะนำ: ทำตามคำแนะนำในการสุ่มตัวอย่างตัวอย่างจากกระพุ้งแก้มในคู่มือการใช้งาน และเช็ดให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้เพื่อให้เซลล์ติดเข้ากับไม้กวาดในช่องปากได้เพียงพอสำหรับการสกัดจีโนมดีเอ็นเอสำหรับการสกัดตัวอย่างจุดเลือดสามารถเพิ่มพื้นที่การตัดจุดเลือดได้อย่างเหมาะสม
3. Foregene Protease ได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างไม่เหมาะสม ส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน
คำแนะนำ: ยืนยันสภาวะการเก็บรักษา Foregene Protease หรือแทนที่ด้วย Foregene Protease ใหม่สำหรับปฏิกิริยาของเอนไซม์
4. การเก็บรักษาชุดอุปกรณ์อย่างไม่เหมาะสมหรือเวลาในการจัดเก็บนานเกินไป ส่งผลให้ส่วนประกอบบางอย่างในชุดอุปกรณ์ทำงานล้มเหลว
คำแนะนำ: ซื้อชุดแยก DNA ของ Buccal swab ใหม่สำหรับขั้นตอนที่เกี่ยวข้อง
5. Buffer WB ไม่เติมเอธานอลสัมบูรณ์
คำแนะนำ: ยืนยันว่า buffer WB เพิ่มปริมาตรเอธานอลสัมบูรณ์ที่ถูกต้อง
6. เติมสารชะลงในฟิล์มซิลิโคนอย่างไม่ถูกต้อง
คำแนะนำ: เติมสารชะละลายที่อุ่นไว้ล่วงหน้า 65 °C ลงไปตรงกลางของเยื่อซิลิโคนแล้วทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ
แยก DNA จีโนมที่ให้ผลตอบแทนต่ำ
สาเหตุที่เป็นไปได้ดังต่อไปนี้:
1. การเก็บรักษาตัวอย่างหรือการเก็บรักษาที่ไม่เหมาะสมเป็นเวลานานเกินไปนำไปสู่การย่อยสลายดีเอ็นเอของจีโนม
คำแนะนำ: ควรเก็บตัวอย่างจาก Oral Swab ที่สดใหม่ และไม่ควรใช้ Swab ที่เก็บรักษาไว้สำหรับการสกัด DNA ของจีโนม
2. หากปริมาณตัวอย่างเนื้อเยื่อน้อยเกินไป ปริมาณ DNA ของจีโนมที่สกัดได้จะน้อยลง
คำแนะนำ: ทำตามคำแนะนำในการสุ่มตัวอย่างด้วย Oral Swab ในคู่มือการใช้งาน โดยเช็ดให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ เพื่อให้เซลล์สามารถติดเข้ากับ Oral Swab ได้เพียงพอสำหรับการสกัด DNA ของจีโนม
3. Foregene Protease ได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างไม่เหมาะสม ส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน
คำแนะนำ: ยืนยันสภาวะการเก็บรักษา Foregene Protease หรือแทนที่ด้วย Foregene Protease ใหม่สำหรับปฏิกิริยาของเอนไซม์
4. ปัญหาการชะล้าง
คำแนะนำ: ใช้ Buffer EB ในการชะล้าง;ถ้าใช้ ddH2O หรือสารชะอื่นๆ ยืนยันว่า pH ของสารชะอยู่ระหว่าง 7.0-8.5
5. eluate ไม่ได้ถูกเพิ่มทีละหยดอย่างถูกต้อง
คำแนะนำ: หยดสารชะลงไปตรงกลางของเยื่อซิลิโคนและทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ
6. น้ำยาชะสะสมน้อยเกินไป
คำแนะนำ: ใช้ eluent สำหรับการชะ DNA ของจีโนมตามที่กำหนดในคำแนะนำ อย่างน้อยไม่น้อยกว่า 15 ไมโครลิตร
ความบริสุทธิ์ต่ำของ DNA จีโนมที่แยกได้
ความบริสุทธิ์ของจีโนมของ DNA ที่ต่ำอาจนำไปสู่ความล้มเหลวหรือผลลัพธ์ที่ไม่น่าพอใจของการทดลองขั้นปลาย เช่น: ไม่สามารถเปิดเอ็นไซม์ได้ PCR ไม่สามารถรับชิ้นส่วนของยีนที่สนใจได้ เป็นต้น
สาเหตุที่เป็นไปได้มีดังนี้:
1. มลพิษเฮเทอโรโปรตีน, มลพิษ RNA
การวิเคราะห์: ไม่ได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ Buffer PW;คอลัมน์การล้างบัฟเฟอร์ PW ไม่ได้ถูกล้างโดยใช้ความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ถูกต้อง
คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีการตกตะกอนในส่วนลอยของตะกอนก่อนที่จะเติมเอทานอลต้องแน่ใจว่าได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ตามคำแนะนำ และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้
2. มลพิษไอออนสิ่งเจือปน
การวิเคราะห์: คอลัมน์การล้างบัฟเฟอร์ WB ถูกละเว้นหรือล้างเพียงครั้งเดียว ส่งผลให้เกิดการปนเปื้อนของไอออนิกที่ตกค้าง
คำแนะนำ: อย่าลืมล้าง Buffer WB 2 ครั้งตามคำแนะนำเพื่อกำจัดไอออนที่ตกค้างให้ได้มากที่สุด
3. การปนเปื้อนของเอนไซม์ RNA
การวิเคราะห์: เพิ่ม RNases ต่างประเทศในบัฟเฟอร์การดำเนินการล้างบัฟเฟอร์ PW ไม่ถูกต้อง ส่งผลให้ RNase ตกค้าง ส่งผลต่อการดำเนินการทดลอง RNA ดาวน์สตรีม เช่น การถอดรหัสในหลอดทดลอง
คำแนะนำ: ชุดแยกกรดนิวคลีอิกซีรีส์ Foregene สามารถลบ RNA ได้โดยไม่ต้องเติม RNase เพิ่มเติม ดังนั้นชุดแยก DNA ของ buccal Swab/FTA Card จึงไม่จำเป็นต้องเพิ่ม RNaseต้องแน่ใจว่าได้ปฏิบัติตามคำแนะนำสำหรับคอลัมน์ Buffer PW Washing Purification และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้
4. กากเอทานอล
การวิเคราะห์: Buffer WB ไม่ได้ทำการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าหลังจากล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์
คำแนะนำ: ดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าที่ถูกต้องตามคำแนะนำ
5. มลพิษสิ่งเจือปนอื่น ๆ
การวิเคราะห์: ตัวอย่างที่บันทึกไว้หรือตัวอย่างพิเศษจะไม่ได้รับการปรับสภาพ
คำแนะนำ: ปฏิบัติต่อตัวอย่างอย่างละเอียดตามคำแนะนำ
