คำถามที่พบบ่อยสำหรับชุดแยก RNA ของสัตว์ทั้งหมด

การวิเคราะห์ปัญหาที่คุณอาจพบต่อไปนี้การสกัด RNA ของเนื้อเยื่อสัตว์/เซลล์ will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ไม่มีการสกัด RNA หรือผลผลิต RNA ต่ำ

มักจะมีปัจจัยหลายอย่างที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการกู้คืน เช่น: ปริมาณ RNA ของตัวอย่างเนื้อเยื่อ วิธีการดำเนินการ ปริมาณการชะ ฯลฯ

1. ดำเนินการหมุนเหวี่ยงในอ่างน้ำแข็งหรือไครโอเจนิก (4 °C) ระหว่างการทำงาน

คำแนะนำ: ใช้งานที่อุณหภูมิห้อง (15-25°C) ตลอดกระบวนการทั้งหมด ห้ามแช่น้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ

2. การเก็บรักษาตัวอย่างที่ไม่เหมาะสมหรือเวลาเก็บตัวอย่างมากเกินไป

คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างที่อุณหภูมิ -80 °C หรือแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และหลีกเลี่ยงการใช้น้ำแข็งละลายซ้ำๆพยายามใช้เนื้อเยื่อสดหรือเซลล์เพาะเลี้ยงในการสกัด RNA

3. การสลายตัวอย่างไม่เพียงพอ

คำแนะนำ: เมื่อทำการทำให้เนื้อเยื่อเป็นเนื้อเดียวกัน ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเนื้อเยื่อถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันเพียงพอ และเซลล์เนื้อเยื่อถูกแยกออกอย่างเพียงพอเพื่ออธิบายการปลดปล่อย RNA

4. เติมตัวชะไม่ถูกต้อง

คำแนะนำ: ยืนยันว่า RNase-Free ddH₂O จะถูกเพิ่มทีละหยดที่ตรงกลางของเมมเบรนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์

5. ไม่ได้เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RL2 หรือ Buffer RW2

คำแนะนำ: ทำตามคำแนะนำ เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RL2 และ Buffer RW2 แล้วผสมให้เข้ากันก่อนใช้ชุด

6. ปริมาณตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่เหมาะสม

คำแนะนำ: ใช้ทิชชู่ 10-20 มก. หรือ (1-5) × 10⁶เซลล์ต่อบัฟเฟอร์ 500 ไมโครลิตร RL1 เนื่องจากการใช้เนื้อเยื่อมากเกินไปอาจส่งผลให้การสกัด RNA ลดลง

7. ปริมาณการชะที่ไม่เหมาะสมหรือการชะที่ไม่สมบูรณ์

คำแนะนำ: ปริมาณการชะของคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์คือ 50-200 ไมโครลิตร;หากผลการชะไม่เป็นที่พอใจ ขอแนะนำให้ยืดเวลาการจัดวางที่อุณหภูมิห้องหลังจากเพิ่ม ddH ที่ปราศจาก RNase ที่อุ่นแล้ว₂O เช่น 5-10 นาที

8.คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์มีเอธานอลตกค้างหลังจากการล้างบัฟเฟอร์ RW2

คำแนะนำ: หากมีเอทานอลตกค้างหลังจากการล้างบัฟเฟอร์ RW2 ให้ปั่นแยกหลอดเปล่าเป็นเวลา 1 นาที เวลาสำหรับการปั่นแยกหลอดเปล่าสามารถเพิ่มเป็น 2 นาที หรือสามารถวางคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อกำจัดเอทานอลที่ตกค้างอย่างเพียงพอ

RNA บริสุทธิ์ถูกย่อยสลาย

คุณภาพของ RNA ที่บริสุทธิ์เกี่ยวข้องกับปัจจัยต่างๆ เช่น การเก็บรักษาตัวอย่าง การปนเปื้อนของ RNase และการจัดการ เป็นต้น

1. เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่ทันเวลา

คำแนะนำ: หากตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเซลล์ไม่ได้ใช้ในเวลาที่เหมาะสมหลังการเก็บ ให้เก็บรักษาด้วยความเย็นทันทีที่อุณหภูมิ -80 °C หรือไนโตรเจนเหลวในการแยก RNA ให้ใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเซลล์ที่เพิ่งถ่ายเมื่อทำได้

2. การละลายน้ำแข็งซ้ำของตัวอย่างเนื้อเยื่อ

คำแนะนำ: เมื่อเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อ ทางที่ดีควรตัดเป็นชิ้นเล็กๆ เพื่อการเก็บรักษา และนำชิ้นใดชิ้นหนึ่งออกเมื่อใช้เพื่อหลีกเลี่ยงการละลายน้ำแข็งซ้ำของตัวอย่างและการย่อยสลายของ RNA

3. แนะนำให้ใช้ RNase หรือไม่สวมถุงมือ หน้ากาก ฯลฯ ในระหว่างการผ่าตัด

คำแนะนำ: การทดลองสกัด RNA ทำได้ดีที่สุดในห้องปรับแต่ง RNA ที่แยกจากกัน และล้างตารางก่อนการทดลอง

สวมถุงมือและหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้งในระหว่างการทดลองเพื่อลดการย่อยสลาย RNA ที่เกิดจากการแนะนำของ RNase

4. รีเอเจนต์ปนเปื้อน RNase ระหว่างการใช้งาน

คำแนะนำ: แทนที่ด้วย Animal Total RNA Isolation Kit ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง

5. หลอดปั่นแยก ทิป ฯลฯ ที่ใช้ในการจัดการ RNA ปนเปื้อน RNase

คำแนะนำ: ยืนยันว่าหลอด centrifuge ทิป ปิเปต ฯลฯ ที่ใช้ในการสกัด RNA นั้นปราศจาก RNase ทั้งหมด

RNA ที่ได้รับบริสุทธิ์จะส่งผลต่อการทดลองขั้นปลาย

RNA บริสุทธิ์โดยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ ถ้าไอออนเกลือ ปริมาณโปรตีนมากเกินไปจะส่งผลต่อการทดลองปลายน้ำ เช่น: การถอดความแบบย้อนกลับ Northern Blot et al.

1. RNA ที่ถูกชะออกมีเกลือไอออนตกค้าง

คำแนะนำ: ยืนยันว่าได้เติมเอทานอลในปริมาตรที่ถูกต้องใน Buffer RW2 และทำการล้างคอลัมน์ทำให้บริสุทธิ์ 2 ครั้งด้วยความเร็วแรงเหวี่ยงที่ระบุสำหรับการทำงานหากมีเกลือไอออนตกค้าง ให้ปล่อยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ไว้ที่ Buffer RW2 เป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และทำการปั่นแยกเพื่อกำจัดการปนเปื้อนของเกลือให้ได้มากที่สุด

2. เอทานอลตกค้างใน RNA ที่ชะล้าง

คำแนะนำ: ยืนยันว่าหลังจากการล้างด้วยบัฟเฟอร์ RW2 ให้ดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าที่ความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ระบุสำหรับการทำงาน เพิ่มเวลาของการดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าเป็น 2 นาทีหากยังมีเอทานอลตกค้างอยู่ หรือทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากการปั่นแยกหลอดเปล่าเพื่อให้กำจัดเอทานอลตกค้างได้สูงสุด

การแยกชนิดของกรดนิวลซีอิก

ชุดแยก RNA ของ Foregene สามารถรับการแยก/สกัด RNA ทั้งหมดจากแหล่งที่มาของตัวอย่างต่อไปนี้: เนื้อเยื่อสัตว์ พืช เซลล์ ไวรัส เลือด ฯลฯ

ฉันจะจัดเก็บชุดได้อย่างไร

เก็บอุณหภูมิห้องได้นาน 24 เดือน