รีเวิร์สทรานสคริปเทสแบบดั้งเดิมไม่สามารถทนต่ออุณหภูมิสูงได้ (อุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดสำหรับกิจกรรม MMLV คือ 37-50°C และ AMV คือ 42-60°C)RNA ของไวรัสที่ซับซ้อนกว่านั้นไม่สามารถแปลงกลับเป็น cDNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพที่อุณหภูมิต่ำ ส่งผลให้ประสิทธิภาพการตรวจจับลดลงโดยทั่วไปแล้ว RT-qPCR แบบดั้งเดิมต้องการการมีส่วนร่วมของเอนไซม์หลักสองตัว (reverse transcriptase และ DNA polymerase) ซึ่งทำให้ไม่สามารถลดความซับซ้อนของการทำงานของระบบปฏิกิริยาและลดค่าใช้จ่ายได้ในที่นี้ เราจะแนะนำรีเวิร์สทรานสคริปต์ที่ทนต่ออุณหภูมิสูงสองรายการ ได้แก่ TtH และ RevTaqเอนไซม์ทั้งสองนี้มีการทำงานของ DNA polymerase ด้วย ดังนั้นจึงเรียกว่าเอนไซม์สองหน้าที่

TtH DNA พอลิเมอเรส

คุณต้องเคยได้ยินเกี่ยวกับ TtH ซึ่งมาจากแบคทีเรียที่ชอบความร้อน Thermus thermophilus HB8เมื่อมีไอออนบวกสองชนิด เช่น Mg2+ ก็จะมีฤทธิ์ของ DNA polymeraseมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในปฏิกิริยา PCR เช่นเอนไซม์ Taq แต่มีความต้านทานความร้อนสูงกว่าเอนไซม์ Taq ดังนั้นจึงมีผลดีกว่าใน PCR ด้วยเทมเพลตเนื้อหา GC สูง

· เอ็นไซม์นี้โดยพื้นฐานแล้วไม่มีกิจกรรมของเอกโซนิวคลีเอส 3′→5′ และกิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส 5′→3′ ดังนั้นจึงสามารถใช้สำหรับการหาลำดับไดดีออกซีได้

· เอนไซม์นี้มีกิจกรรม RTaseเมื่อมี Mn2+ กิจกรรม RTase จะได้รับการปรับปรุงเมื่อใช้คุณลักษณะนี้ สามารถใช้เพื่อทำปฏิกิริยาการถอดความแบบย้อนกลับและปฏิกิริยา PCR ในหลอดเดียวกัน นั่นคือ RT-PCR แบบขั้นตอนเดียวอย่างไรก็ตาม เมื่อมี Mn2+ ความแม่นยำของ RT-PCR จะไม่สูงกิจกรรม RT ไม่มีส่วนเกี่ยวข้องกับกิจกรรม rnaase H

· กิจกรรมที่เพิ่มขึ้นของ Tth-DNA polymerase (pH9, เหมาะสมที่สุด +55℃～+70℃, สูงสุด +95℃) ช่วยแก้ปัญหาที่เกิดจากโครงสร้างทุติยภูมิของ RNAcDNA ที่เป็นผลลัพธ์สามารถขยายได้โดย PCR ที่มีเอนไซม์เดียวกันโดยมี Mg2+ ไอออน

· ความสามารถของ Tth-DNA polymerase ในการถอดรหัสย้อนกลับและการขยาย DNA ที่อุณหภูมิสูงทำให้เอนไซม์นี้มีประโยชน์สำหรับ RT-PCR เชิงปริมาณ การโคลนนิ่ง และการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนของเซลล์และ RNA ของไวรัส
· Tth-DNA polymerase ใช้สำหรับ RT-PCR เพื่อขยาย RNA สูงถึง 1kb

คุณสมบัติและข้อดี

Tth DNA พอลิเมอเรส:

• ตรวจสอบให้แน่ใจว่าขนาดผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) ที่เหมาะสมที่สุด อย่างน้อย 1,000 bp ในปฏิกิริยา RT-PCR

• ใช้ดีออกซีไรโบนิวคลีโอไซด์ไตรฟอสเฟตดัดแปลงเป็นสารตั้งต้น

• ไม่เกี่ยวข้องกับกิจกรรม RNase H

• มีเสถียรภาพทางความร้อนสูงเพื่อแก้ปัญหาต่างๆ ซึ่งมักเกี่ยวข้องกับโครงสร้างทุติยภูมิสูงที่มีอยู่ใน RNA

RevTaq RT-PCR DNA พอลิเมอเรส

DNA polymerase ที่ทนความร้อนพร้อมกิจกรรมการถอดรหัสย้อนกลับ

RevTaq-RT-PCR-DNA พอลิเมอเรสเป็นเอ็นไซม์สองหน้าที่ที่ได้รับการออกแบบทางวิศวกรรม ทนความร้อนสูง พร้อมรีเวิร์สทรานสคริปเทสและกิจกรรมของ DNA พอลิเมอเรสที่ได้รับจากการวิวัฒนาการโดยตรงและการประดิษฐ์

· ครึ่งชีวิตของ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ที่ 95°C นั้นมากกว่า 40 นาที

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ช่วยให้สามารถถอดความแบบย้อนกลับที่อุณหภูมิสูงได้โดยตรงจากแม่แบบ RNA และขั้นตอนการถอดความแบบย้อนกลับสามารถทำซ้ำได้หลายครั้งเพื่อสร้างแม่แบบ cDNA เพิ่มเติม

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase อนุญาตให้ใช้ RT-PCR แบบ "ขั้นตอนเป็นศูนย์" (ไม่มีขั้นตอนการถอดความแบบย้อนกลับด้วยความร้อนแบบไอโซเทอร์มอล) เนื่องจากในขั้นตอนการขยาย PCR แบบวนซ้ำ การถอดความแบบย้อนกลับและการขยาย DNA จะเกิดขึ้นพร้อมกันนอกจากนี้ยังส่งเสริมปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับที่อุณหภูมิสูง จึงช่วยลดปัญหาที่พบในการหลอมละลายของโครงสร้างทุติยภูมิที่แข็งแรงใน RNA ที่อุณหภูมิสูง

· เนื่องจากสูตร hot-start ที่ใช้ aptamer เป็นหลัก RevTaq RT-PCR DNA polymerase จะให้ผลลัพธ์ที่ดีกว่าเมื่ออุณหภูมิการหลอมและการขยายสูงกว่า 57°C

· เนื่องจากเอนไซม์ทนความร้อน จึงแนะนำให้ออกแบบไพรเมอร์และโพรบที่มีจุดหลอมเหลวสูงมาก (>60°C)

· ขอแนะนำให้ปรับอุณหภูมิของขั้นตอนการหลอม/การต่อให้เหมาะสมที่สุดผ่านการไล่ระดับอุณหภูมิในระหว่างกระบวนการตั้งค่าปฏิกิริยา

· ยิ่งอุณหภูมิสูง ความจำเพาะของ PCR ยิ่งสูงโดยปกติแล้ววงจรการถอดความแบบย้อนกลับจะดำเนินการที่อุณหภูมิสูงกว่ารอบ PCR เนื่องจาก DNA Primer:RNA Template hybridization มักมีจุดหลอมเหลวสูงกว่า DNA Primer:cDNA Template duplex

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ได้รับการดัดแปลงพันธุกรรมและปรับให้เหมาะสม และขนาดของแอมพลิคอนอยู่ระหว่าง 60-300 bp

ขีดจำกัดการตรวจจับ DNA polymerase ของ RevTaq RT-PCR ถึง 4 สำเนา/

ระบบปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุด (การสร้างไพรเมอร์ที่มีจุดหลอมเหลวสูง) จะแสดงในรูปRevTaq RT-PCR DNA polymerase-driven RT-PCR แสดงความไวได้ดีกว่าการผสมหลัก RT-qPCR 1 ขั้นตอนของ TaqPath และการตรวจจับตัวอย่างการเจือจางตัวอย่างที่ต่ำกว่า

ข้อดีเพิ่มเติม:

ฟังก์ชันเริ่มต้นอย่างรวดเร็ว → สามารถข้ามขั้นตอนการเสียสภาพธรรมชาติเมื่อความร้อนเริ่มต้นได้

สูตร aptamer แบบ Hot-start → ให้การทำงานของเอนไซม์ 100% ทันทีและป้องกันการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงที่อุณหภูมิต่ำ (<57°C)

ฟังก์ชันการตัดแยก → ขั้นตอนการสกัด RNA ถูกละไว้ เนื่องจาก RevTaq RT-PCR DNA polymerase สามารถประมวลผลตัวอย่างปฏิกิริยาอย่างหยาบได้เช่นกันสามารถทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ของยูคาริโอต แบคทีเรีย และไวรัสได้ทันทีด้วยวงจร RT-PCR แบบร้อน

ระดับวัตถุดิบ IVD → มาตรฐานคุณภาพสูงและราคาที่แข่งขันได้สูง