เคล็ดลับในการปรับปรุงการกู้คืนกาว

1. เพิ่มโหลดตัวอย่างระหว่างอิเล็กโตรโฟรีซิส

2. ใช้บัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิสที่เตรียมใหม่

3. เมื่อตัดกาว พยายามตัดเฉพาะกาวที่มีแถบเพื่อลดปริมาณการตัดกาว: ไม่จำเป็นต้องใช้กาวที่มีเศษเล็กเศษน้อย มิฉะนั้นจะส่งผลต่ออัตราการฟื้นตัว

4. หลังจากละลายกาวสองชิ้นขึ้นไปแล้ว ให้ใช้หลอดไม่ว่าจะมีปริมาตรมากเพียงใด และย้ายไปยังคอลัมน์เดียวกัน

5. สารละลายที่เติมในโซลอาจมากกว่านี้เล็กน้อย ซึ่งจะเอื้อต่อการจับตัวของ DNA กับเยื่อหุ้มเซลล์มากกว่า แต่โดยทั่วไปไม่เกิน 750ul

6. กุญแจสำคัญในการกู้คืนเจลคือการผูก DNA เข้ากับคอลัมน์ผ่านความเข้มข้นของเกลือ ความเป็นกรด (ประจุ) และความไม่ชอบน้ำของสารละลายในคอลัมน์ดังนั้น หาก pH ของบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิสสูงเกินไป สามารถเติม 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ลงในโซลได้เพื่อให้ดักจับโมเลกุลดีเอ็นเอบนเมมเบรนได้ดีขึ้น สามารถเติมไอโซโพรพานอล 30% เพื่อให้ความร้อนในของเหลวหลังจากละลายกาว

7. ก่อนเติมสารชะ ให้ปล่อยคอลัมน์ไว้ที่อุณหภูมิห้องสักสองสามนาที (ประมาณ 10 นาที) เพื่อให้เอทานอลระเหยจนหมด

8. สุดท้าย เพิ่มสารชะน้อยลงเพื่อลดปริมาณการกู้คืนโดยทั่วไป สารชะ 30-50μl ใช้สำหรับชะ (ไม่น้อยเกินไป มิฉะนั้น จะไม่สามารถทำให้เมมเบรนเปียกได้ ซึ่งไม่เอื้อต่อการชะ)หยดสารละลายจะอยู่ตรงกลางของเมมเบรน เพื่อชะล้าง DNA ที่จับกับเมมเบรนออกจนหมด

9. หลังจากเติมสารชะแล้ว สามารถชะลงในอ่างน้ำ 55 องศาเป็นเวลา 5 นาที หรือวางไว้ในอ่างน้ำ 50 องศานานกว่า 10 นาที หรือปิดผนึกด้วยพาราฟิล์มที่อุณหภูมิ 4 องศาในชั่วข้ามคืน จากนั้นปั่นแยกเพื่อการกู้คืนในวันรุ่งขึ้น ผลดี

10.เพิ่ม eluate ที่หมุนเหวี่ยงกลับไปที่คอลัมน์การดูดซับและหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง

วิธีการและขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับการกู้คืนผลิตภัณฑ์ PCR

1. การรีไซเคิลยางธรรมดา

หากคุณต้องการกู้คืนกาว ควรใช้ชุดอุปกรณ์ซึ่งสะดวกและมีอัตราการกู้คืนสูงกว่าเล็กน้อยหากคุณต้องการกู้คืนด้วยตนเองจริงๆ คุณสามารถเพิ่มปริมาณ TE เป็น 3 เท่าหลังจากตัดกาวหลังจากละลายในอ่างน้ำ ฟีนอล ฟีนอล/คลอโรฟอร์มจะถูกแยกออกอย่างสะอาด และเอทานอลจะตกตะกอนแค่นั้นแหละ.

2. การกู้คืน DNA จากเจลจุดหลอมเหลวต่ำ

การทำให้ชิ้นส่วน DNA บริสุทธิ์ เติม TE (10 มิลลิโมล/ลิตร Tris-HCl pH8.0, 0.1 มิลลิโมล/ลิตร EDTA) เท่ากับปริมาตรของเจล และวางในอ่างน้ำ 65°C เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อให้เจลละลายจนหมด

หลังจากนำไปที่อุณหภูมิห้อง ฟีนอลในปริมาณที่เท่ากัน (อิ่มตัวด้วย TE, TE ถูกผนึกไว้ที่ชั้นบน และชั้นล่างของฟีนอลถูกเอาออก) และผสมอย่างเบามือ (ไม่ต้องผสม) และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีทำซ้ำ 1-2 ครั้ง

นำส่วนเหนือตะกอนมาเติม 0.1 ปริมาตรของโซเดียมอะซิเตต 3 โมล/ลิตร (pH 5.2) และเอทานอลสัมบูรณ์ 2.5 เท่าของปริมาตรเพื่อดำเนินการตกตะกอนเอทานอลละลาย DNA ที่บริสุทธิ์ด้วย TE ในปริมาณที่เหมาะสม วัดปริมาณ และเตรียมสำหรับการใช้งาน (สามารถใช้สำหรับการวิเคราะห์โครงสร้างยีนเป้าหมาย การเตรียมโพรบ ฯลฯ)

3. การกู้คืน PCR ที่มีความจำเพาะในการขยายสัญญาณที่ดี

หากความจำเพาะของการขยาย PCR นั้นดี ก็เป็นเพียงการทำให้บริสุทธิ์และการนำผลิตภัณฑ์ PCR กลับมาใช้ใหม่คุณสามารถเติมโปรตีเนส K 50 มก./มล. ลงในผลิตภัณฑ์ PCR ที่ 37 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง สกัดด้วยฟีนอล/คลอโรฟอร์ม 1 ครั้ง สกัดด้วยคลอโรฟอร์ม 1 ครั้ง และเติมส่วนเหนือตะกอน 0.1 ปริมาตรโซเดียมอะซิเตตถูกนำกลับมาใช้ใหม่โดยการตกตะกอนด้วยเอทานอลสัมบูรณ์ 2.5 ปริมาตร

สินค้าที่เกี่ยวข้อง:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/