วิธี PCR และการปนเปื้อนของกรดนิวคลีอิกในห้องปฏิบัติการทดสอบกรดนิวคลีอิกเปรียบเสมือนเหรียญสองด้านเราเลือกได้ว่าจะมีหรือไม่ แต่เราเลือกไม่ได้ว่าจะอยากได้หรือใช้จ่าย

1. การตรวจหาสารกำจัดดีเอ็นเอ

เพื่อให้บรรลุการกำจัดการปนเปื้อนในละอองของกรดนิวคลีอิกในเชิงพื้นที่ ก่อนอื่นจำเป็นต้องคัดกรองสารกำจัดดีเอ็นเอที่สามารถกำจัดกรดนิวคลีอิกในสถานะของเหลวได้เนื่องจากมี DNA remover ที่ใช้งานได้จริงไม่มากนักสำหรับวิธีการทดลอง โปรดดูที่: เครื่องกำจัด DNA ไม่สามารถเป็น "มุมลับ" ของห้องปฏิบัติการได้!

ในการทดลองนี้ 100 สำเนา/ไมโครลิตร (CT ประมาณ 31) ของ ASFV พลาสมิดและ DNA remover ที่วัดปริมาณด้วย digital PCR ผสมกันในปริมาตรที่เท่ากัน จากนั้นทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที 20 นาที และ 30 นาทีตามลำดับหลังจากการสกัดกรดนิวคลีอิก การขยาย qPCR ได้ดำเนินการเปรียบเทียบการควบคุมเชิงบวกที่ผสมกับพลาสมิดและน้ำเนื่องจากการทดลองไม่ได้เสร็จสิ้นในเวลาเดียวกัน อาจมีความคลาดเคลื่อนระหว่างผลลัพธ์ แต่ไม่ส่งผลต่อการสรุปผลการทดลองจนถึงตอนนี้ ฉันได้ประเมินผลิตภัณฑ์กำจัด DNA เชิงพาณิชย์แล้ว 10 รายการเฉพาะผลิตภัณฑ์หมายเลข 1, หมายเลข 6 และหมายเลข 8 เท่านั้นที่สามารถย่อยสลายพลาสมิดดีเอ็นเอในสถานะของเหลวได้อย่างมีประสิทธิภาพผลิตภัณฑ์อื่นแทบไม่มีผล

ตารางที่ 1 ผลการกำจัดกรดนิวคลีอิกของ DNA remover ที่มีจำหน่ายทั่วไป

2. การทดลองผลการกำจัด DNA ของสารฆ่าเชื้อที่ใช้กันทั่วไป

1. การคัดกรองสารฆ่าเชื้อที่ใช้กันทั่วไป

มีสารฆ่าเชื้อหลายชนิดที่ใช้กันทั่วไปในห้องปฏิบัติการ: อัลดีไฮด์ ฟีนอล แอลกอฮอล์ เกลือควอเทอร์นารีแอมโมเนียม เปอร์ออกไซด์ การเตรียมคลอรีน และกรดและเบสผลการฆ่าเชื้อของสารฆ่าเชื้อเหล่านี้ต่อจุลินทรีย์ได้รับการตรวจสอบอย่างสมบูรณ์โดยการทดลอง แต่ไม่มีข้อมูลการทดลองที่เพียงพอเกี่ยวกับผลการย่อยสลายของกรดนิวคลีอิกห้องปฏิบัติการทดสอบกรดนิวคลีอิกต้องการสารฆ่าเชื้อที่ไม่เพียงแต่มีผลในการฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ที่ดีเท่านั้น แต่ยังสามารถย่อยสลาย DNA ได้อีกด้วยผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าการเตรียมคลอรีน 84 ชนิดและกรดไตรคลอโรไอโซไซยานูริกและกรดไฮโดรคลอริก 1 M มีเพียงสองครั้งเท่านั้นที่ตรงตามข้อกำหนดเนื่องจากกรดไฮโดรคลอริก 1 M มีฤทธิ์กัดกร่อนสูง ขอแนะนำให้ใช้การเตรียมคลอรีนเพื่อกำจัดของเสียในห้องปฏิบัติการทดสอบกรดนิวคลีอิกอย่างไรก็ตาม การเตรียมคลอรีนจะกัดกร่อนโลหะและไม่สามารถใช้ฆ่าเชื้อเครื่องมือและอุปกรณ์ได้

ตารางที่ 2 ผลการกำจัด DNA ของสารฆ่าเชื้อประเภทต่างๆ

2. ความเข้มข้นขั้นต่ำที่มีประสิทธิภาพของการเตรียมคลอรีน

สารฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นส่วนประกอบมีผลในการย่อยสลาย DNA ที่รุนแรง แต่เนื่องจากโลหะมีฤทธิ์กัดกร่อนและการระคายเคือง จึงสามารถใช้ทำความสะอาดพื้น เคาน์เตอร์ที่ไม่ใช่โลหะ ทิปแบบแช่ หลอดหมุนเหวี่ยง และรายการทดสอบอื่นๆ

ตาม "หลักเกณฑ์ทางเทคนิคในการฆ่าเชื้อโรคปอดอักเสบจากโรคหลอดเลือดหัวใจตีบใหม่": สารมลพิษ (เลือด สารคัดหลั่ง และอาเจียนของผู้ป่วย) คลอรีนที่มีจำหน่าย 5g/L-10g/L น้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีน;พื้น ผนัง และพื้นผิววัตถุใช้คลอรีน 1 กรัม/ลิตร น้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีน: เสื้อผ้า เครื่องนอน และสิ่งทออื่นๆ จะถูกแช่ในน้ำยาฆ่าเชื้อคลอรีนที่มีคลอรีน 0.5 กรัม/ลิตร เป็นเวลา 30 นาที จากนั้นจึงทำความสะอาดตามปกติ

ตารางที่ 3 ผลการกำจัด DNA ของน้ำยาฆ่าเชื้อคลอรีนที่มีความเข้มข้นต่างกัน

ผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่า: เมื่อความเข้มข้นของคลอรีนที่มีประสิทธิภาพมากกว่าหรือเท่ากับ 1.2 ก./ลิตร น้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นส่วนประกอบสามารถย่อยสลายพลาสมิดได้อย่างสมบูรณ์ 100 สำเนา/ไมโครลิตร เมื่อใช้เป็นเวลา 5 นาทีเมื่อออกฤทธิ์นาน 10 นาที สารฆ่าเชื้อ 84 ชนิดที่มีความเข้มข้นของคลอรีนที่มีประสิทธิภาพมากกว่าหรือเท่ากับ 0.6 กรัม/ลิตร สามารถย่อยสลายพลาสมิดได้ทั้งหมด 100 สำเนา/ไมโครลิตร

3. การทดลองกำจัดอากาศที่ปนเปื้อนด้วยละอองของกรดนิวคลีอิก

วิธีทำความสะอาดอากาศที่ปนเปื้อนด้วยละอองของกรดนิวคลีอิกความคิดส่วนใหญ่คือการสร้างสภาพแวดล้อมที่ปนเปื้อนด้วยละอองลอยแล้วทำความสะอาด หรือทำความสะอาดกรดนิวคลีอิกหลังจากการปนเปื้อนสำหรับฉัน การทดลองที่ไม่สามารถทำซ้ำได้และผลลัพธ์ของการทดลองไม่สามารถวิเคราะห์เชิงปริมาณได้นั้นไม่มีความหมาย ดังนั้นฉันจึงยืมวิธีการบางอย่างในการฆ่าเชื้อโรคในอากาศด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อดู "ข้อกำหนดทั่วไป GB27948-2020 สำหรับสารฆ่าเชื้อในอากาศ" และ "ข้อกำหนดทางเทคนิคในการฆ่าเชื้อ"

1. วัสดุทดสอบ

1.1 DNA remover: ในการทดลองนี้ ได้เลือก DNA remover ที่มีจำหน่ายทั่วไปสองตัว 6 และ 8 ในตารางที่ 1

1.2 พลาสมิดทดสอบ: เมื่อพิจารณาว่าค่า CT ของมลพิษในห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่จะสูงกว่า 30 ความเข้มข้นของพลาสมิดของยีน ASFV ที่ใช้ในครั้งนี้คือประมาณ 100 สำเนา/ไมโครลิตร และ PCR CT เชิงปริมาณเรืองแสงมีค่าประมาณ 31.07เติมพลาสมิดลงในสำลีก้านและผึ่งลมให้แห้ง

1.3 เครื่องมือทดสอบ: เครื่องมือฆ่าเชื้อ Bilingkehan KVBOX ซึ่งได้รับการสนับสนุนโดย Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd. มีประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อโรคในอากาศที่ยอดเยี่ยมด้วยสารฆ่าเชื้อไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ และสามารถฆ่าสปอร์และจุลินทรีย์อื่น ๆ ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

1.4 พื้นที่ทดสอบ: หน้าต่างถ่ายเทปิดประมาณ 0.1 ลูกบาศก์เมตร

2. วิธีทดสอบ

ปริมาณของน้ำยาฆ่าเชื้อที่ตั้งไว้บนเครื่องฆ่าเชื้อคือ 10 มล. และความเข้มข้นคือ 100 มล./ลบ.ม. ซึ่งสูงกว่า "GB27948-2020 ข้อกำหนดทั่วไปสำหรับสารฆ่าเชื้อในอากาศ" มาก: เมื่อใช้สเปรย์ฆ่าเชื้อโรค ปริมาณของสารฆ่าเชื้อควรเป็น ≤10 มล./ลบ.ม.