การทดสอบในห้องปฏิบัติการเริ่มต้นด้วยการเก็บตัวอย่าง และการเก็บตัวอย่างเป็นวิธีที่ง่ายที่สุดที่จะมองข้ามสิ่งที่สำคัญที่สุดในการเก็บตัวอย่างคือการเลือกประเภทตัวอย่างที่ถูกต้อง ใช้เครื่องมือสุ่มตัวอย่างที่เหมาะสม และดำเนินการขนส่งและดำเนินการตามสมควร

I. ประเภทตัวอย่าง

ประเภทตัวอย่างทั่วไปมีดังนี้:

วิธีการสุ่มตัวอย่างสามารถอ้างอิงถึงข้อกำหนดทางเทคนิคสำหรับการตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อมของไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ในตลาดการค้าเกษตร (ตลาดสด)”:

1. เก็บตัวอย่างจากไม้กวาดจากลำคอ มือ เสื้อผ้า และสิ่งของอื่น ๆ ของผู้ปฏิบัติงาน: จำเป็นต้องใช้น้ำยารักษาไวรัสในหลอดเก็บตัวอย่างไวรัสและแทรกซึมเข้าไปในสำลีก้านเก็บตัวอย่างทั้งหมดพื้นผิวดิน) ทาซ้ำและล้างมากกว่า 3 ครั้งในเวลาเดียวกัน จำเป็นต้องทำการสุ่มตัวอย่างแบบกระจายหลายจุดบนพื้นผิวของวัตถุตัวอย่าง

2. ตัวอย่างเช็ดพื้นผิวอาหาร: ไม่สามารถเก็บตัวอย่างอาหารได้โดยตรงควรแยกอาหารที่จะเก็บอย่างระมัดระวังและเก็บไว้ในถุงเก็บตัวอย่างที่สะอาดก่อนเก็บตัวอย่างจากไม้กวาดจำเป็นต้องใช้น้ำยาถนอมไวรัสในหลอดเก็บตัวอย่างไวรัสหลังจากแช่สำลีตัวอย่างจนเต็มแล้ว เพื่อทาซ้ำและล้างพื้นผิวของตัวอย่างอาหารที่จะเก็บมากกว่า 3 ครั้งในเวลาเดียวกัน จำเป็นต้องทำการสุ่มตัวอย่างแบบกระจายหลายจุดบนพื้นผิวตัวอย่าง

3. ตัวอย่างน้ำเสีย: ตามการจำหน่ายของระบบระบายน้ำในตลาด เลือกสถานที่เก็บตัวอย่างน้ำเสีย 2-3 แห่ง โดยเน้นที่การรวบรวมเครือข่ายท่อภายใน ปลายน้ำของทิศทางการไหลของน้ำ หรือการเชื่อมต่อกับเครือข่ายท่อเทศบาลในการเก็บตัวอย่างจากไม้กวาด ให้จุ่มลงในสิ่งปฏิกูลด้วยสำลีในการสุ่มตัวอย่างเพื่อให้มันดูดซับสิ่งปฏิกูลและล้างในหลอดเก็บตัวอย่างมากกว่า 3 ครั้งในการเก็บตัวอย่างน้ำเสีย ให้ใช้ขวดพลาสติกโพลีเอทิลีนเพื่อเก็บตัวอย่างน้ำเสีย 30-500 มล.สำหรับการเก็บรวบรวมสิ่งปฏิกูลที่มีปริมาตรมากกว่า 500 มล. สามารถใช้ถังพลาสติกโพลีเอทิลีนหรืออุปกรณ์เพิ่มคุณค่าพิเศษสำหรับตัวอย่างน้ำในไซต์งานได้ในขณะเดียวกันก็จำเป็นต้องทำการสุ่มตัวอย่างแบบกระจายหลายจุดสำหรับสถานที่เก็บตัวอย่างสิ่งปฏิกูล

4. ตัวอย่างสัตว์: สำหรับสัตว์ที่มีชีวิต สามารถใช้ Sampling Swab เพื่อเก็บ Swab บนพื้นผิวร่างกาย, Oropharyngeal Swab และ Anal Swab และสามารถเก็บและบันทึกตัวอย่างอุจจาระหรือสารคัดหลั่งตามนั้นลงในใบบันทึกสำหรับตัวอย่างสัตว์ที่ผ่านการถลกหนัง ฯลฯ ให้ใช้สำลีพันก้านเพื่อเก็บตัวอย่างพื้นผิวร่างกายและตัวอย่างจากโพรงในร่างกายจำเป็นต้องใช้น้ำยารักษาไวรัสในหลอดเก็บตัวอย่างไวรัสเพื่อแทรกซึมเข้าไปในสำลีก้อนเก็บตัวอย่างจนหมด จากนั้นจึงทาซ้ำกับพื้นผิวของตัวอย่างอาหารที่จะเก็บชาบูมากกว่า 3 ครั้งในเวลาเดียวกัน จำเป็นต้องทำการสุ่มตัวอย่างแบบกระจายหลายจุดบนพื้นผิวตัวอย่าง

5. เครื่องใช้อื่นๆ ได้แก่ ภาชนะสำหรับขนส่งและเพาะพันธุ์สัตว์ เช่น กระชังหรือตู้ปลาขั้นแรก สังเกตหรือทำความเข้าใจประเภทของสัตว์ที่จัดเก็บและเพาะพันธุ์ในภาชนะบรรจุ จากนั้นเก็บตัวอย่างจากไม้กวาดที่ผนังด้านในของภาชนะหรือตัวอย่างของเหลวในภาชนะบรรจุ

6.เก็บตัวอย่างละอองลอยในพื้นที่ที่มีผู้คนมารวมตัวกัน พื้นที่ค้าขาย สำนักงาน และห้องพักผ่อนในท้องถิ่นที่มีการระบายอากาศไม่ดี

II. เครื่องมือสุ่มตัวอย่าง
1. หลอดเก็บเลือด
หากคุณจำเป็นต้องทำการทดสอบกรดนิวคลีอิกและตัวอย่างสารต้านการแข็งตัวของเลือดในภายหลัง ขอแนะนำให้ใช้หลอดเลือดสุญญากาศที่มีสารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA เพื่อเก็บเลือดสำหรับตัวอย่างซีรั่ม ขอแนะนำให้ใช้หลอดเลือดสุญญากาศที่ไม่มีสารกันเลือดแข็ง

2. ไม้กวาดเก็บตัวอย่าง

ขอแนะนำให้ใช้ polypropylene swab แทน calcium alginate swab หรือไม้ swabs เนื่องจากอาจมีสารที่ยับยั้งไวรัสบางชนิดและขัดขวางการทดสอบ PCRไม่สามารถใช้ไม้พันสำลีที่มีหัวสำลีได้ เนื่องจากเส้นใยฝ้ายมีการดูดซับโปรตีนที่เข้มข้น และไม่สามารถชะล้างลงในสารละลายถนอมผ้าที่ตามมาได้ง่าย

ใน “ข้อมูลจำเพาะทางเทคนิคสำหรับการเก็บรวบรวมแบบผสม 10-in-1 และการตรวจจับกรดนิวคลีอิกของไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่” มีข้อกำหนดอย่างชัดเจนว่า “ไม้กวาดเก็บตัวอย่างควรทำจากโพลีเอสเตอร์ ไนลอน และวัสดุอื่นๆ ที่ไม่ใช่ผ้าฝ้ายและไม่ใช่แคลเซียมอัลจิเนต และที่จับควรทำจากวัสดุที่ไม่ใช่ไม้จุดแตกหักอยู่ห่างจากด้านบนของหัวไม้กวาดประมาณ 3 ซม. ซึ่งง่ายต่อการหัก”

CDC ในสหรัฐอเมริกายังระบุด้วยว่า “ใช้ก้านสำลีใยสังเคราะห์กับก้านพลาสติกหรือลวดเท่านั้นห้ามใช้แคลเซี่ยมแอลจิเนตสแวบหรือไม้กวาดกับด้ามไม้เนื่องจากอาจมีสารที่ยับยั้งไวรัสบางชนิดและขัดขวางการทดสอบ PCR

ปัจจุบันใช้กันอย่างแพร่หลายคือไม้กวาดไนลอนที่ปราศจากเชื้อแบบใช้แล้วทิ้งรวมกับแท่งพลาสติกFlocking Swab มีอัตราการดูดซับและปล่อยน้ำที่ดีกว่าตามไซต์เก็บตัวอย่างที่แตกต่างกัน หัวไม้กวาดยังมีขนาดและเส้นใยที่แตกต่างกันความหนา.”

3. วิธีการรักษาตัวอย่างการขนส่ง

โซลูชันการถนอมรักษาไวรัส: ความเข้มข้นของเกลือกัวนิดีนในปริมาณที่เหมาะสมและส่วนประกอบต่างๆ ของการสลายตัวของไวรัสสามารถแยกไวรัสโดยตรงเพื่อปล่อยกรดนิวคลีอิก ยับยั้ง RNase และ DNase และรับประกันความสมบูรณ์ของกรดนิวคลีอิก ซึ่งสามารถใช้สำหรับการตรวจจับ qPCR ในภายหลังไม่สามารถใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงและแยกเชื้อไวรัสได้

สารละลายสำหรับขนส่งและเก็บรักษาไวรัส: ประกอบด้วยเกลือ กรดอะมิโน วิตามิน กลูโคส และโปรตีนที่จำเป็นต่อการอยู่รอดของไวรัส ซึ่งสามารถรักษากิจกรรมของไวรัสได้สามารถใช้สำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกและตรวจหาไวรัสในอนาคต และยังสามารถใช้สำหรับการเพาะและแยกไวรัสได้อีกด้วย

4. หลอดเก็บตัวอย่างและถุงใส่ตัวอย่าง

หลอดเก็บตัวอย่างควรเป็นหลอดพลาสติกปลอดเชื้อที่มีฝาเกลียวซึ่งไม่ดูดซับกรดนิวคลีอิกควรคลุมหลอดตัวอย่างแต่ละหลอดด้วยถุงเก็บตัวอย่างเพื่อป้องกันการรั่วไหลและการปนเปื้อนของตัวอย่าง

สาม.สารรบกวนในตัวอย่าง

สารรบกวนในการทดลอง PCR

1. การรบกวนจากภายนอก

สารที่มีอยู่ในตัวอย่างร่างกายสามารถรบกวนการตรวจหาสารอื่นๆ

เลือด:heme (>1mg/ml), hemin (>0.1ng/μl), ไตรกลีเซอไรด์, IgG ฯลฯ;

ปัสสาวะ:ยูเรีย (20mM);

อุจจาระ:โพลีแซคคาไรด์จากพืช, โคเลต;

เนื้อเยื่อ:โปรตีเอส, คอลลาเจน;

น้ำนม: โปรตีเอส แคลเซียมไอออน;

ยาเสพติด: ยาปฏิชีวนะ ยาต้านไวรัส ฮอร์โมน ฯลฯ

อื่น.

2. การรบกวนจากภายนอก

มาจากสารที่สามารถรบกวนการตรวจหาสารอื่นในหลอดทดลองสารเติมแต่งตัวอย่างและสารที่สัมผัสได้ระหว่างการเก็บตัวอย่างและการประมวลผล:

อุปกรณ์ทดสอบ: เจลแยกซีรั่ม, ภาชนะเก็บตัวอย่างและจุกยาง, สายสวน, น้ำยาล้างสายสวน, แป้งถุงมือ ฯลฯ

ยาต้านการแข็งตัวของเลือด: เฮปาริน (>0.1 U/mL), EDTA (>0.5 mM) ฯลฯ;

ตัวทำละลายอินทรีย์: ไอโซโพรพานอล (>0.1 IU/มล.), เบทาอีน, ไดเมทิลซัลฟอกไซด์, ฟอร์มาไมด์, กลีเซอรีน, PEG ฯลฯ;

ยาฆ่าเชื้อ: แอลกอฮอล์ (เอทานอล>1%) อัลดีไฮด์ ฟีนอล (ฟีนอล>0.2%) เปอร์ออกไซด์ กรดแก่ (HCL) ด่างแก่ (NaOH) ฯลฯ

ผงซักฟอก:SDS (>0.005%);

ดิน: ฮิวมัส

สีย้อม: คราม

อื่น.

ภายใต้สภาวะการเก็บตัวอย่างกลางแจ้งจริง เช่น การเก็บตัวอย่างสิ่งแวดล้อม ตัวอย่างอาจมีสารรบกวนหลายชนิด และองค์ประกอบของสารรบกวนในแต่ละตำแหน่งก็แตกต่างกัน ซึ่งจำเป็นต้องมีการทดลองการรบกวน PCR ตามสภาพท้องถิ่น

IV.สภาวะการเก็บตัวอย่างและการขนส่ง

ตัวอย่างทางคลินิกที่เก็บใหม่ควรส่งไปยังห้องปฏิบัติการภายใน 2 ถึง 4 ชั่วโมงหลังการเก็บที่อุณหภูมิ 2°C ถึง 8°Cเก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃ ภายใน 24 ชม.ตัวอย่างที่ใช้ในการแยกไวรัสและการตรวจหากรดนิวคลีอิกควรทำการทดสอบโดยเร็วที่สุดชิ้นงานที่สามารถทดสอบได้ภายใน 24 ชั่วโมงสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C;ตัวอย่างที่ไม่สามารถตรวจพบได้ภายใน 24 ชั่วโมงควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -70°C หรือต่ำกว่า (หากไม่เป็นเช่นนั้น- เก็บที่อุณหภูมิ 70°C ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ -20°C)

สรุป:การเก็บตัวอย่าง การขนส่ง และการจัดเก็บตัวอย่างที่ได้มาตรฐานเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการทดสอบในภายหลังผลลบเท็จของการทดสอบในห้องปฏิบัติการจำนวนมากเกิดจากการเก็บ ขนส่ง และจัดเก็บตัวอย่างที่ไม่เหมาะสม ซึ่งนำไปสู่การสลายตัวของกรดนิวคลีอิกจากไวรัสอย่างไรก็ตาม ห้องปฏิบัติการหลายแห่งยังคงละเลยความสำคัญของการสุ่มตัวอย่างฉันหวังว่าบทความนี้สามารถปลุกความสนใจของทุกคนในการสุ่มตัวอย่างและทำการสุ่มตัวอย่างที่เป็นวิทยาศาสตร์และมีเหตุผลมากขึ้น!

สินค้าที่เกี่ยวข้อง:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method)-สำหรับการตรวจจับการกลายพันธุ์จากบราซิล แอฟริกาใต้ และสหราชอาณาจักร