พีซีอาร์, หลายรายการ พีซีอาร์, PCR ในแหล่งกำเนิด, รีเวิร์สพีซีอาร์, อาร์ที-พีซีอาร์, คิวพีซีอาร์(1)–พีซีอาร์

เราจะมาไล่เรียงแนวคิด ขั้นตอน และรายละเอียดของ PCR ต่างๆ

Ⅰ. พีซีอาร์

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส เรียกว่า PCR เป็นเทคโนโลยีทางชีววิทยาระดับโมเลกุลที่ใช้ในการขยายชิ้นส่วนดีเอ็นเอเฉพาะถือได้ว่าเป็นการจำลองแบบพิเศษของ DNA ในหลอดทดลองDNA polymerase (DNA Polymerase I) ถูกค้นพบในปี 1955 และ Klenow Fragment ของ E. Coli ซึ่งมีค่าในการทดลองและใช้งานได้จริง ถูกค้นพบโดย Dr. H. Klenow ในต้นปี 1970 แต่เนื่องจากเอนไซม์นี้ไม่ทนต่ออุณหภูมิ อุณหภูมิสูงสามารถย่อยสลายได้ ดังนั้นจึงไม่เป็นไปตามปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสที่มีการเสื่อมสภาพที่อุณหภูมิสูงเอนไซม์ที่ใช้อยู่ในปัจจุบัน (เรียกว่า Taq polymerase) แยกได้จากแบคทีเรียในน้ำพุร้อน Thermus Aquaticus ในปี 1976 ลักษณะเฉพาะของมันคือสามารถต้านทานอุณหภูมิสูงและเป็นเอนไซม์ในอุดมคติ แต่มีการใช้กันอย่างแพร่หลายหลังทศวรรษ 1980แนวคิดดั้งเดิมของต้นแบบดั้งเดิมดั้งเดิมของ PCR นั้นคล้ายคลึงกับการซ่อมแซมและการคัดลอกยีน ซึ่งเสนอโดย Dr. KJell Kleppe ในปี 1971 เขาได้ตีพิมพ์สำเนายีนแบบง่ายๆ และระยะสั้นชุดแรก (คล้ายกับปฏิกิริยาสองรอบแรกของ PCR)PCR ที่พัฒนาขึ้นในปัจจุบันได้รับการพัฒนาโดย Dr. Kary B. Mullis ในปี 1983 Dr. Mullis ให้บริการบริษัท PE ในปีนั้น PE จึงมีสถานะพิเศษในอุตสาหกรรม PCRดร. มัลลิสตีพิมพ์บทความที่เกี่ยวข้องกับ Saiki และบทความอื่นๆ อย่างเป็นทางการครั้งแรกในปี 1985 ตั้งแต่นั้นเป็นต้นมา มีการใช้ PCR เป็นระยะทางหลายพันไมล์ต่อวัน และกล่าวได้ว่าคุณภาพของเอกสารที่เกี่ยวข้องทำให้วิธีการวิจัยอื่นๆ มากมายไม่อร่อยต่อจากนั้น เทคโนโลยี PCR ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ชีวภาพและการประยุกต์ใช้ทางคลินิก กลายเป็นเทคโนโลยีที่สำคัญที่สุดในการวิจัยอณูชีววิทยามัลลิสยังได้รับรางวัลโนเบลสาขาเคมีในปี 1993

พีซีอาร์หลักการ

หลักการพื้นฐานของเทคโนโลยี PCR นั้นคล้ายคลึงกับกระบวนการจำลองแบบตามธรรมชาติของ DNA และความจำเพาะขึ้นอยู่กับไพรเมอร์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่เสริมปลายทั้งสองของลำดับเป้าหมายPCR ประกอบด้วยการเสื่อมสภาพ-การหลอม-การขยายปฏิกิริยาพื้นฐานสามขั้นตอน: ①การเสื่อมของ DNA แม่แบบ: หลังจากที่ DNA แม่แบบได้รับความร้อนที่อุณหภูมิประมาณ 93°C ในช่วงระยะเวลาหนึ่ง สารละลาย DNA คู่สำหรับ DNA แบบสายคู่ที่เกิดขึ้นจากการขยาย PCR ของ DNA แม่แบบออกจากกัน ทำให้เป็นสายเดี่ยวเพื่อให้สามารถรวมกับไพรเมอร์เพื่อเตรียมพร้อมสำหรับปฏิกิริยารอบถัดไป②การหลอม (สารประกอบ) ของ DNA แม่แบบและไพรเมอร์: หลังจากที่ DNA แม่แบบได้รับความร้อนและเสื่อมสภาพเป็นสายโซ่เดียว อุณหภูมิจะลดลงเหลือประมาณ 55°Cลำดับที่สมบูรณ์ของไพรเมอร์และแม่แบบ DNA สายเดี่ยว③ส่วนขยายของไพรเมอร์: แม่แบบ DNA-การจับไพรเมอร์ขึ้นอยู่กับการกระทำของ TaqDNA พอลิเมอเรส โดยมี dNTP เป็นวัตถุดิบในการทำปฏิกิริยารักษาหลักการของการทำซ้ำ สังเคราะห์ห่วงโซ่การคัดลอกแบบกึ่งสำรองใหม่ที่เสริมห่วงโซ่ DNA ของแม่แบบ และทำซ้ำวงจรการเสื่อมสภาพ-การหลอม-ส่วนขยาย สามขั้นตอนสามารถรับ "ห่วงโซ่การคัดลอกกึ่งสำรอง" ได้มากขึ้น และห่วงโซ่ใหม่นี้จะพร้อมใช้งานอีกครั้ง กลายเป็นแม่แบบสำหรับรอบถัดไปใช้เวลา 2-4 นาทีในการวนซ้ำ ยีนเป้าหมายสามารถขยายได้หลายล้านครั้งใน 2-3 ชั่วโมง

มาตรฐานพีซีอาร์ระบบปฏิกิริยา

ห้าองค์ประกอบของปฏิกิริยา PCR

มีสารห้าชนิดหลักที่เกี่ยวข้องกับปฏิกิริยา PCR ได้แก่ ไพรเมอร์ เอนไซม์ dNTP แม่แบบ และบัฟเฟอร์ (ต้องมี Mg2+)[ขั้นตอน PCR]

กระบวนการ PCR มาตรฐานแบ่งออกเป็นสามขั้นตอน

1. การเสื่อมสภาพของ DNA (90°C-96°C): แม่แบบ DNA แบบสายคู่ภายใต้การดำเนินการทางความร้อน พันธะไฮโดรเจนจะแตกตัว ก่อตัวเป็น DNA สายเดี่ยว

2. การหลอม (25℃ -65℃): อุณหภูมิของระบบจะลดลง ไพรเมอร์จะรวมกับแม่แบบ DNA เพื่อสร้างสายโซ่คู่เฉพาะที่

3. ส่วนขยาย (70℃ -75℃): ภายใต้การทำงานของเอนไซม์ Taq (ประมาณ 72°C เป็นกิจกรรมที่ดีที่สุด) dNTP ถูกใช้เป็นวัตถุดิบ ขยายจากปลาย 5′ ของไพรเมอร์ → 3′ สิ้นสุด การสังเคราะห์และเทมเพลตเสริมห่วงโซ่ DNA ซึ่งกันและกัน

แต่ละวัฏจักรจะถูกทำให้เสียสภาพ หลอมและขยาย ทำให้ปริมาณ DNA เพิ่มขึ้นเป็นสองเท่าในปัจจุบัน เนื่องจากพื้นที่ขยายเสียงสั้น PCR บางส่วนสามารถทำซ้ำได้ในเวลาอันสั้น แม้ว่ากิจกรรมของเอนไซม์ Taq จะไม่เหมาะสม ดังนั้นจึงสามารถเปลี่ยนเป็นสองขั้นตอน นั่นคือ การหลอมและการต่อสามารถทำได้ที่อุณหภูมิ 60°C-65°C ในเวลาเดียวกันเพื่อลดขั้นตอนการยกและระบายความร้อนและเพิ่มความเร็วในการตอบสนอง

คุณสมบัติปฏิกิริยา PCR

● ความเฉพาะเจาะจงสูง

ปัจจัยชี้ขาดเฉพาะของการตอบสนอง PCR คือ: ①การผสมเฉพาะของไพรเมอร์และ DNA แม่แบบ②หลักการจับคู่ฐาน③ความภักดีของปฏิกิริยาการสังเคราะห์พอลิเมอเรสของ TaqDNA④ความจำเพาะและการอนุรักษ์ของยีนเป้าหมาย

ส่วนผสมของไพรเมอร์และเทมเพลตที่ถูกต้องคือกุญแจสำคัญการยึดเกาะของไพรเมอร์กับแม่แบบและส่วนขยายของไพรเมอร์เชนนั้นขึ้นอยู่กับหลักการของการจับคู่เบสที่เป็นด่างความภักดีของปฏิกิริยาการสังเคราะห์โพลิเมอเรสและความทนทานต่ออุณหภูมิสูงของ Taq DNA polymerase เพื่อทำให้การจับ (สารประกอบ) ของแม่แบบและไพรเมอร์ในปฏิกิริยาสามารถทำได้ที่อุณหภูมิสูงขึ้นความจำเพาะของการรวมกันเพิ่มขึ้นอย่างมากคลิปสามารถรักษาความถูกต้องในระดับสูงโดยการเลือกพื้นที่พันธุกรรมเป้าหมายที่มีความอนุรักษ์สูงและความอนุรักษ์นิยมสูง ความจำเพาะจะสูงขึ้น

● ความไวสูง

ปริมาณการผลิตของผลิตภัณฑ์ PCR เพิ่มขึ้นตามดัชนีซึ่งสามารถขยายเทมเพลตเริ่มต้นของ Picker (PG=10-12) เพื่อเพิ่มระดับไมโครคอนโทรลเลอร์ให้อยู่ในระดับไมโครกรัม (μg= -6)สามารถตรวจจับเซลล์เป้าหมายได้ตั้งแต่ 1 ล้านเซลล์;ในการตรวจหาไวรัส ความไวของ PCR สามารถเข้าถึง 3 RFUs (จุดว่างที่เกิดหน่วย);อัตราการตรวจพบขั้นต่ำในวิทยาศาสตร์แบคทีเรียคือ 3 แบคทีเรีย

● ง่ายและรวดเร็ว

การสะท้อน PCR ใช้ Taq DNA polymerase ที่อุณหภูมิสูง ซึ่งเพิ่มสารละลายปฏิกิริยาในคราวเดียว นั่นคือปฏิกิริยาการเสื่อมสภาพ-การหลอม-การขยายบนสารละลายขยาย DNA และหม้อน้ำโดยทั่วไป ปฏิกิริยาการขยายจะเสร็จสิ้นภายใน 2 ถึง 4 ชั่วโมงผลิตภัณฑ์เสริมโดยทั่วไปจะวิเคราะห์ด้วยดาบไฟฟ้า และไม่ต้องใช้ไอโซโทป ไม่มีมลพิษจากกัมมันตภาพรังสี และส่งเสริมได้ง่าย

● ความบริสุทธิ์ของชิ้นงานต่ำ

ไม่จำเป็นต้องแยกไวรัสหรือแบคทีเรียและเซลล์เพาะเลี้ยงผลิตภัณฑ์ดิบของ DNA และ RNA สามารถใช้เป็นตัวขยายสัญญาณได้การตรวจจับการขยายตัวของ DNA สามารถใช้โดยตรงกับตัวอย่างทางคลินิก เช่น เลือด ของเหลวในร่างกาย น้ำยาล้างไอ เส้นผม เซลล์ และเนื้อเยื่อที่มีชีวิต

พีซีอาร์ปัญหาทั่วไป

● False Negative ไม่มีแถบขยาย

ขั้นตอนสำคัญของปฏิกิริยา PCR ได้แก่ ① การเตรียมแม่แบบกรดนิวคลีอิก ② คุณภาพและความจำเพาะของไพรเมอร์ ③ คุณภาพของเอนไซม์ ④ สภาวะของวัฏจักร PCRการหาสาเหตุควรวิเคราะห์และศึกษาลิงค์ข้างต้นด้วย

เทมเพลต: ① เทมเพลตประกอบด้วยโปรตีนเบ็ดเตล็ด ② เทมเพลตประกอบด้วยตัวยับยั้งเอนไซม์ Taq ③ โปรตีนในเทมเพลตไม่ถูกกำจัด โดยเฉพาะโปรตีนกลุ่มในโครโมโซม⑤ การเสื่อมสภาพของกรดนิวคลีอิกดีมิเนอร์ไม่ทั่วถึงเมื่อคุณภาพของเอ็นไซม์และไพรเมอร์ดี จะไม่มีแถบขยาย ซึ่งน่าจะเป็นการรักษาทางเดินอาหารของตัวอย่างมีบางอย่างผิดปกติกับกระบวนการสกัดกรดนิวคลีอิกแม่แบบ ดังนั้นเพื่อเตรียมสารละลายย่อยที่มีประสิทธิภาพและเสถียร ควรแก้ไขขั้นตอนและไม่เปลี่ยนแปลงโดยพลการ

การยับยั้งการทำงานของเอนไซม์: ควรใช้เอนไซม์ใหม่หรือทั้งเอนไซม์เก่าและใหม่ร่วมกันเพื่อวิเคราะห์ว่ากิจกรรมของเอนไซม์หายไปหรือไม่เพียงพอ ซึ่งนำไปสู่การลบที่ผิดพลาดควรสังเกตว่าบางครั้งลืมเอนไซม์ Taq หรือ ethidium bromide

ไพรเมอร์: คุณภาพของไพรเมอร์ ความเข้มข้นของไพรเมอร์ และความเข้มข้นของไพรเมอร์ทั้งสองนั้นสมมาตรกันหรือไม่เป็นสาเหตุทั่วไปที่ทำให้ PCR ล้มเหลวหรือแถบความถี่ที่เพิ่มขึ้นไม่เหมาะและมีแนวโน้มที่จะกระจายมีปัญหาเกี่ยวกับคุณภาพของไพรเมอร์ของบางหมายเลขแบทช์ไพรเมอร์ทั้งสองมีความเข้มข้นสูงและความเข้มข้นต่ำ ทำให้เกิดการขยายแบบไม่สมมาตรที่มีประสิทธิภาพต่ำวิธีการรับมือคือ: ① เลือกไพรเมอร์ที่ดีเพื่อสังเคราะห์หน่วย② ความเข้มข้นของไพรเมอร์ไม่เพียงแต่ขึ้นอยู่กับค่า OD เท่านั้น แต่ยังให้ความสำคัญกับของเหลวดั้งเดิมของไพรเมอร์ด้วยเพื่อสร้าง agar sugar gel electrophoresisต้องมีโซนแถบไพรเมอร์ และความสว่างของไพรเมอร์ทั้งสองควรจะสอดคล้องกันโดยทั่วไปสายพาน, PCR อาจล้มเหลวในขณะนี้ และควรแก้ไขด้วยหน่วยสังเคราะห์ไพรเมอร์หากไพรเมอร์มีค่าสูง ความสว่างจะต่ำ และความเข้มข้นของไพรเมอร์จะต้องสมดุลเมื่อเจือจาง③ ควรจ่ายไพรเมอร์และเก็บไว้ที่ความเข้มข้นสูงเพื่อป้องกันการแช่แข็งหลายครั้งหรือชิ้นส่วนทำความเย็นในระยะยาวของตู้เย็น ซึ่งจะทำให้ไพรเมอร์เสื่อมสภาพและเสื่อมสภาพ④ การออกแบบไพรเมอร์ไม่มีเหตุผล เช่น ความยาวของไพรเมอร์ไม่เพียงพอ และเกิด di cluster ระหว่างไพรเมอร์

ความเข้มข้นของ Mg2+: ความเข้มข้นของไอออนของ Mg2+ มีผลอย่างมากต่อประสิทธิภาพการขยาย PCRความเข้มข้นที่มากเกินไปสามารถลดการขยาย PCR ของเพศตรงข้ามได้หากความเข้มข้นต่ำเกินไป เอาต์พุตการขยายสัญญาณ PCR จะทำให้การขยายสัญญาณ PCR ล้มเหลวโดยไม่มีแถบขยาย

การเปลี่ยนแปลงของปริมาตรปฏิกิริยา: ปริมาตรที่ใช้ในการขยาย PCR คือ 20ul, 30ul และ 50ul หรือ 100uL แอปพลิเคชันปริมาณมากสำหรับการขยาย PCR ถูกกำหนดตามวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกันของการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และการทดสอบทางคลินิกหลังจากสร้างปริมาตรขนาดเล็กเช่น 20ul จำเป็นต้องสร้างเงื่อนไขสายไฟเมื่อสร้างขนาด มิฉะนั้นจะล้มเหลว

เหตุผลทางกายภาพ: การแปลงร่างมีความสำคัญมากสำหรับการขยาย PCRหากอุณหภูมิการเสื่อมสภาพต่ำ เวลาการเสื่อมสภาพจะสั้น มีแนวโน้มที่จะเกิดผลลบปลอมอุณหภูมิการหลอมที่ต่ำเกินไปอาจทำให้เกิดการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง และลดประสิทธิภาพการขยายที่เจาะจงมีผลอย่างมากต่อการรวมกันของไพรเมอร์และเทมเพลตเพื่อลดประสิทธิภาพการขยาย PCRบางครั้งจำเป็นต้องใช้เทอร์โมมิเตอร์มาตรฐานเพื่อตรวจจับความแปรปรวน การหลอม และอุณหภูมิที่ขยายในส่วนขยายหรือหม้อหุงละลายน้ำ ซึ่งเป็นสาเหตุหนึ่งที่ทำให้ PCR ล้มเหลว

ตัวแปรของลำดับเป้าหมาย: หากลำดับเป้าหมายเกิดขึ้น การกลายพันธุ์หรือการลบ การรวมต้นแบบและแม่แบบเข้าด้วยกัน หรือเนื่องจากไม่มีลำดับเป้าหมาย ไพรเมอร์และแม่แบบจะสูญเสียลำดับเสริม และการขยาย PCR จะไม่ประสบความสำเร็จ

● ผลบวกลวง

แถบขยายเสียง PCR ปรากฏสอดคล้องกับแถบลำดับเป้าหมาย และบางครั้งแถบนั้นเรียบและสูงขึ้น

การออกแบบ Primer ไม่เหมาะสม: ลำดับการขยายเสียงที่เลือกและลำดับการขยายเสียงที่ไม่มีวัตถุประสงค์มีความคล้ายคลึงกัน ดังนั้นเมื่อมีการขยายสัญญาณ PCR ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ได้รับการขยายจะเป็นลำดับที่ไม่มีวัตถุประสงค์ลำดับเป้าหมายสั้นเกินไปหรือไพรเมอร์สั้นเกินไป และมีแนวโน้มที่จะเกิดผลบวกลวงจำเป็นต้องได้รับการออกแบบใหม่

มลพิษข้ามของลำดับเป้าหมายหรือผลิตภัณฑ์ขยาย: มีสองสาเหตุสำหรับมลพิษนี้: ประการแรก มลพิษข้ามของจีโนมทั้งหมดหรือเซ็กเมนต์ขนาดใหญ่ ซึ่งนำไปสู่ผลบวกลวงผลบวกลวงชนิดนี้สามารถแก้ไขได้ด้วยวิธีต่อไปนี้: ระมัดระวังและนุ่มนวลระหว่างการทำงานเพื่อป้องกันไม่ให้ลำดับเป้าหมายสูดเข้าไปในปืนฉีดตัวอย่างหรือกระเด็นออกจากท่อหมุนเหวี่ยงยกเว้นเอนไซม์และสารที่ไม่สามารถทนต่ออุณหภูมิสูงได้ น้ำยาหรืออุปกรณ์ทั้งหมดควรได้รับการฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงควรใช้ท่อแรงเหวี่ยงและตัวอย่างพร้อมกันเมื่อจำเป็น ก่อนเติมตัวอย่าง หลอดปฏิกิริยาและสารทำปฏิกิริยาจะถูกฉายรังสีอัลตราไวโอเลตเพื่อทำลายกรดนิวคลีอิกที่มีอยู่ประการที่สอง เศษเล็กเศษน้อยในมลพิษทางอากาศชิ้นส่วนขนาดเล็กเหล่านี้สั้นกว่าลำดับเป้าหมาย แต่มีความคล้ายคลึงกันบางอย่างสามารถประกบกันได้หลังจากเสริมไพรเมอร์แล้ว ผลิตภัณฑ์ PCR สามารถขยายได้ ซึ่งจะทำให้เกิดผลบวกลวงสามารถใช้เพื่อลดหรือกำจัดวิธี Nest PCR

● ปรากฏแถบขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจง

แถบที่ปรากฏหลังจากการขยาย PCR ไม่สอดคล้องกับขนาดที่คาดไว้ หรือใหญ่หรือเล็ก หรือในเวลาเดียวกัน หรือในเวลาเดียวกัน แถบขยายเฉพาะและแถบขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงการเกิดขึ้นของแถบที่ไม่เฉพาะเจาะจงคือ ประการแรก ไพรเมอร์ไม่สมบูรณ์ในลำดับเป้าหมาย หรือพอลิเมอไรเซชันของไพรเมอร์เพื่อก่อตัวเป็นไดคลัสเตอร์ประการที่สองคือความเข้มข้นของไอออน MG2+ สูงเกินไป อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป และจำนวนรอบ PCR สัมพันธ์กันประการที่สอง คุณภาพและปริมาณของเอนไซม์บ่อยครั้ง เอ็นไซม์จากบางแหล่งมีแนวโน้มที่จะเกิดแถบที่ไม่พิเศษ และเอ็นไซม์จากแหล่งอื่นจะไม่เกิดขึ้นบางครั้งการขยายตัวของเอนไซม์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงก็เกิดขึ้นเช่นกันมาตรการตอบโต้คือ: ออกแบบสิ่งดึงดูดใจใหม่หากจำเป็นลดปริมาณเอนไซม์หรือเปลี่ยนเอนไซม์จากแหล่งอื่นลดจำนวนหลัก เพิ่มจำนวนแม่แบบให้เหมาะสม และลดจำนวนรอบเพิ่มอุณหภูมิการหลอมอย่างเหมาะสมหรือใช้วิธีจุดอุณหภูมิสองจุด (การลดลง 93°C, การหลอมและการขยายที่ประมาณ 65°C)

● มีลักษณะเป็นขุยหรือเทปเลอะ

การขยายสัญญาณ PCR บางครั้งดูเหมือนว่าจะใช้หรือสายพานแบบเปลือกหรือแบบพรมด้วยเหตุผล เนื่องจากเอนไซม์มีปริมาณมากเกินไปหรือคุณภาพต่ำของเอนไซม์ ความเข้มข้นของ dNTP สูงเกินไป ความเข้มข้นของ Mg2+ สูงเกินไป อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไป และจำนวนรอบมากเกินไปวิธีการรับมือคือ ①ลดปริมาณเอนไซม์หรือเปลี่ยนเอนไซม์จากแหล่งอื่น②ลดความเข้มข้นของ dNTP ③ลดความเข้มข้นของ Mg2+ อย่างเหมาะสม④เพิ่มจำนวนเทมเพลตและลดจำนวนรอบ

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

PCR Heroᵀᴹ (ด้วยสีย้อม)

◮ ความเที่ยงตรงสูงกว่า: 6 เท่าของเอนไซม์ Taq ทั่วไป

◮ ความเร็วในการขยายที่เร็วขึ้น

◮ ปรับแต่งเทมเพลตได้มากขึ้น

◮ ประสิทธิภาพการขยายที่สูงขึ้น

◮ ความทนทานต่อสิ่งแวดล้อมดีขึ้น: วางไว้ที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ รักษากิจกรรมได้มากกว่า 90%

◮ มีกิจกรรม DNA polymerase 5'→3' และกิจกรรม exonuclease 5'→3' โดยไม่มีกิจกรรม exonuclease 3'→5'

PCR Easyᵀᴹ (ด้วยสีย้อม)

ระบบปฏิกิริยาที่ไม่เหมือนใครและ Taq DNA Polymerase ที่มีประสิทธิภาพสูงทำให้ปฏิกิริยา PCR มีประสิทธิภาพการขยาย ความจำเพาะ และความไวที่สูงขึ้น

RT-qPCR Easyᵀᴹ (ขั้นตอนเดียว) -SYBR Green I

◮ ชุดเครื่องมือแบบขั้นตอนเดียวทำให้การถอดรหัสย้อนกลับและ qPCR สองปฏิกิริยาในหลอดเดียวกัน เพียงเพิ่มเทมเพลต RNA, ไพรเมอร์ PCR เฉพาะและ ddH ที่ปราศจาก RNase₂O.

◮ ชุดเครื่องมือนี้สามารถวิเคราะห์ RNA ของไวรัสหรือติดตาม RNA ในเชิงปริมาณได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ

◮ ชุดเครื่องมือนี้ใช้รีเอเจนต์การถอดรหัสแบบย้อนกลับของ Foregene และ Foregene HotStar Taq DNA Polymerase รวมกับระบบปฏิกิริยาที่ไม่เหมือนใครเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายและความจำเพาะของปฏิกิริยาได้อย่างมีประสิทธิภาพ

◮ ระบบปฏิกิริยาที่ปรับให้เหมาะสมทำให้ปฏิกิริยามีความไวในการตรวจจับสูงขึ้น เสถียรภาพทางความร้อนที่แข็งแกร่งขึ้น และความทนทานที่ดีขึ้น

◮ RT-qPCR ง่าย^TM(ขั้นตอนเดียว) -ชุด SYBR Green I มาพร้อมกับสีย้อมอ้างอิงภายใน ROX ซึ่งสามารถใช้เพื่อกำจัดพื้นหลังของสัญญาณและข้อผิดพลาดของสัญญาณระหว่างหลุม ซึ่งสะดวกสำหรับลูกค้าในการใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณรุ่นต่างๆ

RT ง่าย^TMครั้งที่สอง (มาสเตอร์พรีมิกซ์สำหรับ การสังเคราะห์ cDNA สายแรกสำหรับเรียลไทม์พีซีอาร์)

-ความสามารถในการลบ gDNA อย่างมีประสิทธิภาพ ซึ่งสามารถลบ gDNA ในเทมเพลตได้ภายใน 2 นาที

- ระบบการถอดรหัสแบบย้อนกลับที่มีประสิทธิภาพ ใช้เวลาเพียง 15 นาทีในการสังเคราะห์ cDNA สายแรกให้เสร็จสมบูรณ์

- เทมเพลตที่ซับซ้อน: เทมเพลตที่มีเนื้อหา GC สูงและโครงสร้างรองที่ซับซ้อนสามารถย้อนกลับได้ด้วยประสิทธิภาพสูง

- ระบบการถอดรหัสย้อนกลับความไวสูง เทมเพลตระดับ pg ยังสามารถรับ cDNA คุณภาพสูงได้อีกด้วย

- ระบบการถอดความแบบย้อนกลับมีเสถียรภาพทางความร้อนสูง อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 42 ℃ และยังคงมีประสิทธิภาพการถอดความแบบย้อนกลับที่ดีที่ 50 ℃