คุณรู้มากแค่ไหน

เกี่ยวกับ เอ็นการสกัดกรดยูคลีอิก

จุดเริ่มต้นและจุดสิ้นสุดของกรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์

ทุกสิ่งเป็นเรื่องยากในตอนเริ่มต้น กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์นั้นสำคัญที่สุด

การเริ่มต้นของการทดลองระดับโมเลกุลสำหรับการทดลองครั้งต่อไป

ความสำเร็จหรือความล้มเหลวมีผลกระทบที่สำคัญ

เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV แบบเทรซ/อัลตร้าเทรซเป็นที่ชื่นชอบของนักวิจัยทางวิทยาศาสตร์จำนวนมาก เนื่องจากสามารถตรวจจับความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิกและโปรตีนและไอออนของเกลือที่ตกค้างได้ง่าย รวดเร็ว และประหยัด

อย่างที่เราทราบกันดีว่า A260 หมายถึงค่า OD ของการดูดกลืนกรดนิวคลีอิก A280 หมายถึงค่า OD การดูดซับของโปรตีนที่มีความเข้มข้น A230 หมายถึงค่า OD การดูดซับของความเข้มข้นของไอออนเกลือ ดังนั้น A260 จึงสามารถแปลงความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิกได้ A260/280 หมายถึงกากโปรตีน A260/230 หมายถึงกากไอออนเกลือ แต่นี่เป็นเพียงกฎที่นักวิจัยค้นพบจากผลการวัดจำนวนมาก และมันคือ”ธรรมดา” เชื่อว่าจะสามารถอธิบายความบริสุทธิ์ของ DNA และ RNA ได้ในระดับหนึ่ง.ไม่ใช่มาตรฐานเดียวสำหรับการระบุผลผลิตและความบริสุทธิ์ของกรดนิวคลีอิก แต่ใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงเท่านั้น และไม่ใช่ "มาตรฐานทองคำ"

คู่มือ Thermo Fisher ND-2000 เน้นความน่าเชื่อถือของผลการทดสอบ

เหตุผลคือผลลัพธ์ที่ได้จากการใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV ขนาดไมโคร/อัลตร้าไมโครจะสะท้อนถึงผลผลิตและความบริสุทธิ์ของกรดนิวคลีอิกจากด้านข้างเท่านั้น และมีปัจจัยที่มีอิทธิพลมากมาย (เส้นทางแสง ปริมาตรตัวอย่าง ความเข้มข้นของตัวอย่าง ค่า pH ไอออนอื่นๆ ที่ส่งผลต่อการวัดค่าการดูดกลืนแสง ฯลฯ) ค่า OD ที่วัดได้ไม่จำเป็นต้องแม่นยำในเวลาเดียวกัน เนื่องจากขาดความจำเพาะของวัสดุที่ใช้กำหนดค่าการดูดกลืนแสง DNA สายเดี่ยว, DNA สายคู่, RNA, dNTP และโปรตีนบางชนิดล้วนมีจุดสูงสุดในการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 260 นาโนเมตร และความเข้มข้นที่กำหนดโดย A260 เพียงอย่างเดียวไม่จำเป็นต้องเป็น DNA หรือ RNA ที่แท้จริงความเข้มข้น ความสมบูรณ์และความเสื่อมโทรมไม่สามารถตัดสินได้

แล้วจะตัดสินคุณภาพของกรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์ของเราได้อย่างไร?นอกจากการใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV ขนาดไมโคร/อัลตร้าไมโครในการตรวจจับแล้ว วิธีการต่างๆ เช่น agarose gel electrophoresis ยังจำเป็นในการแสดงภาพความบริสุทธิ์และความสมบูรณ์ของกรดนิวคลีอิก และเพื่อระบุความเข้มข้นในระดับหนึ่งด้วยวิธีนี้ ผลผลิตของกรดนิวคลีอิกและความบริสุทธิ์ที่ได้จากผลการตรวจจับของวิธีการต่างๆ จึงมีความน่าเชื่อถือ

การเปรียบเทียบแผนภูมิการทดลอง

DNA จีโนมของเซลล์ H1299 ถูกสกัดโดยใช้ชุดสกัด DNA ของบริษัท A และพบการปนเปื้อนสิ่งเจือปนอย่างมีนัยสำคัญ ส่งผลให้ค่า OD สูง

(ค่าการวัด OD และอิเล็กโทรฟีโรแกรมที่สอดคล้องกัน)

ดัชนีประเมินผล

มี "มาตรฐานทองคำ" สำหรับการทดสอบผลผลิตและคุณภาพของกรดนิวคลีอิกหรือไม่?

เท่าที่เราทราบไม่มีวิธีที่ง่าย รวดเร็ว และราคาถูกไม่ว่าจะเป็นเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส หรือแมสสเปกโตรเมทรี ล้วนสะท้อนถึงความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของกรดนิวคลีอิกในสารละลายจากแง่มุมต่างๆ และจำเป็นต้องตัดสินโดยการอ้างอิงซึ่งกันและกัน

ดัชนีการประเมินที่ดีที่สุดอยู่เสมอแอปพลิเคชันทดลองติดตามผล.ไม่ส่งผลต่อประสิทธิภาพของการถอดรหัสแบบย้อนกลับและการขยาย PCRการได้รับผลิตภัณฑ์แอมพลิฟายเออร์และค่า Ct ที่เชื่อถือได้ และการได้รับลำดับที่สมบูรณ์โดยการจัดลำดับคือการสกัดกรดนิวคลีอิกที่ประสบความสำเร็จ

สรุปแล้ว มุมมองของทฤษฎีอัตราส่วนเพียงอย่างเดียวควรถูกท้าทายด้วยมุมมองของ "การใช้ผลการทดลองขั้นปลายที่ดีเป็นพารามิเตอร์การสกัดที่ดี"!

ชุดสกัด Foregene DNA RNA ที่แนะนำเพื่อให้ได้ DNA/RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูง:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/