ตะกั่ว

RNA ที่ไม่เข้ารหัสแบบยาว lncRNA เป็น RNA แบบไม่เข้ารหัสที่มีความยาวมากกว่า 200 นิวคลีโอไทด์ โดยทั่วไปอยู่ระหว่าง 200-100,000 ntLncRNA ควบคุมการแสดงออกของยีนที่ระดับ epigenetic, การถอดความและการถอดความและมีส่วนร่วมในการปิดเสียงโครโมโซม x, การประทับจีโนมและการปรับเปลี่ยนโครมาติน, การเปิดใช้งานการถอดความ, การควบคุมการถอดรหัสของเซลล์, การควบคุมความแตกต่างของเซลล์ หนึ่งในจุดร้อนในสาขาชีวการแพทย์

01  ประเภทและลักษณะของ LncRNA

lncRNA แบ่งออกเป็นหลายประเภทตามแหล่งที่มาของการก่อตัวของมัน ดังแสดงในรูปด้านบนมีลักษณะดังต่อไปนี้:

1. lncRNAs มักจะยาวกว่า โดยมีการแสดงออกแบบไดนามิกและวิธีการประกบที่แตกต่างกันระหว่างการแยกความแตกต่าง
2. เมื่อเปรียบเทียบกับการเข้ารหัสยีนแล้ว lncRNA มักจะมีระดับการแสดงออกที่ต่ำกว่า
3. lncRNAs ส่วนใหญ่มีความจำเพาะในการแสดงออกทางโลกและเชิงพื้นที่อย่างชัดเจนในกระบวนการสร้างความแตกต่างของเนื้อเยื่อและการพัฒนา
4. มีการแสดงออกของลักษณะเฉพาะในเนื้องอกและโรคอื่นๆ
5. ตำแหน่งเซลล์ย่อยของ lncRNA นั้นมีความหลากหลาย
6. ลำดับมีการอนุรักษ์ต่ำ แต่ฟังก์ชันมีการอนุรักษ์ในระดับหนึ่ง ฯลฯ

02 คำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับ LncRNA Reverse Transcription

เนื่องจากปริมาณ lncRNA ในเซลล์ต่ำ ความยาวที่ยาวและโครงสร้างระดับสูง RNA ดังกล่าวจึงมักมีโครงสร้างที่ซับซ้อน เช่น ก้านลูปหรือกิ๊บติดผม และ RT-qPCR มีแนวโน้มที่จะเกิดปัญหาการถอดรหัสย้อนกลับที่ไม่สำเร็จหรือประสิทธิภาพต่ำ

03 โซลูชันการถอดรหัสย้อนกลับ LncRNA

ในกฎกลาง กระบวนการของไวรัส RNA โดยใช้รีเวิร์สทรานสคริปเทสของพวกมันเองเพื่อสังเคราะห์ดีเอ็นเอโดยใช้อาร์เอ็นเอเป็นเทมเพลตเรียกว่าการถอดรหัสย้อนกลับกระบวนการของการใช้ RNA virus reverse transcriptase เพื่อสังเคราะห์เทมเพลต cDNA ในหลอดทดลอง เรียกว่า การถอดรหัสแบบย้อนกลับองค์ประกอบหลักที่รวมอยู่ในระบบการถอดรหัสแบบย้อนกลับ: เทมเพลต RNA, รีเวิร์สทรานสคริปเทส, ไพรเมอร์ และส่วนประกอบอื่นๆ

1.RNA แม่แบบ

อิทธิพลของเทมเพลต RNA ต่อการถอดความแบบย้อนกลับสะท้อนให้เห็นในโครงสร้าง ความบริสุทธิ์ และความสมบูรณ์ยิ่งความบริสุทธิ์และความสมบูรณ์ของ RNA ที่สกัดออกมาสูงเท่าใด ประสิทธิภาพของการถอดความแบบย้อนกลับก็ยิ่งสูงขึ้นเท่านั้น และผลลัพธ์เชิงปริมาณที่ตามมาก็จะยิ่งแม่นยำมากขึ้นเท่านั้นRNA ที่ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยรีเอเจนต์ในการสกัด RNA ที่ใช้กันทั่วไปมักจะมีการตกค้างของแอลกอฮอล์และเกลือกัวนิดีน ซึ่งมีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทสอย่างมาก

2. รีเวิร์สทรานสคริปเทส

Reverse transcriptase มีอิทธิพลสำคัญในระบบการถอดรหัสย้อนกลับทั้งหมดอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับรีเวิร์สทรานสคริปเทสที่ใช้ในห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่โดยทั่วไปคือ 42°Cในความเป็นจริง การเปิดโครงสร้าง RNA ระดับสูงนั้นต้องการอุณหภูมิที่สูงกว่า และข้อกำหนดสำหรับรีเวิร์สทรานสคริปเทสนั้นสูงกว่า

3.ไพรเมอร์

ไพรเมอร์การถอดความแบบย้อนกลับประกอบด้วยไพรเมอร์เฉพาะยีน ไพรเมอร์แบบสุ่ม และไพรเมอร์ Oligo dTlncRNA ส่วนใหญ่ไม่มีหางของ polyA และสิ่งสำคัญคือต้องจับคู่ไพรเมอร์แบบสุ่มกับ Oligo dT อย่างเหมาะสม

4.ส่วนประกอบอื่นๆ

จากข้อเท็จจริงที่ว่า RNA นั้นย่อยสลายได้ง่ายเป็นพิเศษ การแนะนำส่วนประกอบในระบบการถอดความแบบย้อนกลับสามารถลดลงได้ ซึ่งสามารถป้องกันการเข้ามาของ RNase ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และรับประกันความคืบหน้าของการถอดความแบบย้อนกลับอย่างราบรื่น

Fออริจินอลได้รับจากเทมเพลต RNA การถอดความย้อนกลับเป็น qPCR

คุ้มกันการตรวจจับ lncRNA ของคุณอย่างครอบคลุม

Animal Total RNA Iปลอบใจชุดอุปกรณ์ (พร้อมคอลัมน์การลบ gDNA)

Cell Total RNA Iปลอบใจชุดอุปกรณ์ (พร้อมคอลัมน์การลบ gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (ด้วย gDNase) (Super Premix สำหรับการสังเคราะห์ cDNA สายแรกจาก lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR สีเขียว I

Aข้อดี ofการสกัด RNA:

ชุดนี้ใช้เทคโนโลยีการสกัด RNA รุ่นที่สามโดยไม่จำเป็นต้องใช้ DNase

11 นาทีจากเซลล์เพาะเลี้ยงแบบเพลต 96, 24, 12 และ 6 หลุม การสกัด RNA ของเซลล์รวมคุณภาพสูงที่ปราศจาก gDNA ประสิทธิภาพสูง มีความบริสุทธิ์สูง

ข้อดีของการถอดความแบบย้อนกลับ lncRNA:

ระบบการถอดความแบบย้อนกลับที่พัฒนาขึ้นเป็นพิเศษสำหรับ LncRNA เพื่อกำจัดการปนเปื้อนของ DNA จีโนมอย่างรวดเร็ว

ระบบการถอดความแบบย้อนกลับมีเสถียรภาพทางความร้อนสูงและยังคงมีประสิทธิภาพการถอดความแบบย้อนกลับที่ดีที่อุณหภูมิ 50°C

เทมเพลตที่มีเนื้อหา GC สูงและโครงสร้างรองที่ซับซ้อนสามารถย้อนกลับได้ด้วยประสิทธิภาพสูง

ข้อดีof qพีซีอาร์:

จุดเริ่มต้นที่ร้อนแรง Foregene Taq Polymerase มีประสิทธิภาพการขยายที่สูงขึ้น ความไวในการขยายที่สูงขึ้น และความจำเพาะในการขยายที่สูงขึ้น

Real PCR Easy Mix ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมทำให้ SYBR Green I มีความไวในการตรวจจับที่สูงขึ้น และความเข้มของการเรืองแสงเป็น 3-5 เท่าของผลิตภัณฑ์ที่คล้ายคลึงกัน ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการของการทดลองเชิงปริมาณของฟลูออเรสเซนซ์ประเภทต่างๆ