มีการใช้เอนไซม์ Taq แบบ Hot-start กันอย่างแพร่หลายเมื่อเปรียบเทียบกับ DNA polymerase ทั่วไป เอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนสามารถหลีกเลี่ยงการขยายที่ไม่เฉพาะเจาะจงและการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และสามารถปรับปรุงอัตราความสำเร็จของการขยายยีนเป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยเฉพาะอย่างยิ่งในด้านการทดสอบทางพันธุกรรม เอนไซม์ Taq แบบเริ่มร้อนได้รับการระบุว่าเป็นมาตรฐานบังคับในอุตสาหกรรม และไม่ควรใช้ DNA polymerase ธรรมดาดังที่เห็นได้จากข้างต้น เอนไซม์ Taq แบบ hot-start ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายปัจจุบันมีเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนหลายยี่ห้อในตลาดภายในประเทศ แต่มีเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนที่มีคุณภาพสูงไม่มากนักต้องเผชิญกับผลิตภัณฑ์เอนไซม์ Taq ที่มาแรงมากมาย เราควรเลือกอย่างไร?

1. เลือกเอนไซม์ Taq แบบ hot-start ที่มีประสิทธิภาพในการขยายสูง

ประสิทธิภาพการขยาย PCR นั้นสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับประสิทธิภาพของเอนไซม์ Taqหลังจากระบบปฏิกิริยาเอนไซม์ Taq ที่ดีได้รับการปรับให้เหมาะสม ประสิทธิภาพการขยายจะสูงกว่า 95% และช่วงการขยายของจำนวนแม่แบบเริ่มต้นจะกว้างการขยายตัวที่น่าพอใจสามารถรับได้เมื่อปริมาณยีนเป้าหมายต่ำ และไม่ง่ายที่จะถูกวางยาพิษเมื่อจำนวนเทมเพลตสูง และระยะเวลาการขยายแบบเอ็กซ์โปเนนเชียลนั้นยาวนานสำหรับเอนไซม์ Taq ที่มีประสิทธิภาพต่ำ แม้ว่าระบบปฏิกิริยาจะได้รับการปรับปรุงให้เหมาะสมหลายครั้ง ประสิทธิภาพการขยายก็ยังน้อยกว่า 90% รูปร่าง "S" ของเส้นโค้งการขยายไม่ชัดเจน ความชันมีขนาดเล็ก และเส้นโค้งแบนราบเมื่อจำนวนเทมเพลตต่ำ จะไม่สามารถขยายได้ และเมื่อจำนวนเทมเพลตสูง เอฟเฟ็กต์การขยายจะไม่เหมาะดังนั้น การเลือก DNA polymerase ที่มีประสิทธิภาพการขยายสูงจึงมีความสำคัญต่อความสำเร็จของ PCR และ qPCR

2. เลือกเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนด้วยพลังของเอนไซม์ที่แข็งแกร่ง

พลังเอนไซม์ของเอนไซม์ Taq เกี่ยวข้องกับประสิทธิภาพการขยายโดยทั่วไป ยิ่งพลังของเอ็นไซม์ของเอนไซม์ Taq แบบ hot-start ยิ่งแข็งแกร่งเท่าใด ระยะเวลาการเติบโตแบบเอ็กซ์โปเนนเชียลของการขยาย PCR ก็จะยิ่งนานขึ้น เส้นโค้ง 'รูปตัว S' โดยทั่วไปก็จะยิ่งมีค่าสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์สูงขึ้นเท่านั้น และยิ่งเหมาะสำหรับการตรวจจับ PCR แบบมัลติเพล็กซ์มากขึ้นเท่านั้นแบรนด์ DNA พอลิเมอเรสที่มีพลังของเอนไซม์อ่อนแอโดยทั่วไปสามารถรองรับปฏิกิริยา 2 เพล็กซ์เท่านั้นเมื่อทำปฏิกิริยา 3 เพล็กซ์ เส้นโค้งการขยายจะต่ำ ค่าสัญญาณเรืองแสงจะต่ำ และไม่มีเส้นโค้งการขยายทั่วไป ดังนั้นผลลัพธ์จึงตัดสินได้ยาก

3. เลือกเอนไซม์ Taq แบบ hot-start ที่มีความไวสูง

โดยทั่วไปแล้ว DNA polymerase มีประสิทธิภาพการขยายสูงและมีความไวสูง แต่ก็มีความไม่สอดคล้องกันเช่นกันหากปริมาณยีนเป้าหมายของตัวอย่างที่จะขยายมีค่าต่ำ แนะนำให้ทดสอบความไวในการขยายของเอนไซม์ Taqวิธีการตรวจจับที่พบบ่อยที่สุดคือทำการเจือจางเกรเดียนต์ 10 เท่าหรือ 5 เท่าของชิ้นส่วนพลาสมิดของยีนเป้าหมาย ดำเนินการตรวจจับ PCR ที่การเจือจางที่ต่ำกว่า และเลือกเอนไซม์ Taq ที่เริ่มร้อนซึ่งมีความไวในการตรวจจับสูงกว่า

ดังจะเห็นได้จากข้างต้นว่านักวิจัยจำเป็นต้องเลือกตามความต้องการในการทดลองและเงื่อนไขการให้ทุนของตนเองวิธีที่ดีที่สุดคือทำการทดลองการขยายการเจือจางแบบไล่ระดับสีเพื่อตรวจหาประสิทธิภาพการขยายและความไวของเอนไซม์ Taq แบบเริ่มร้อน

ตัวอย่างของ Foregene's Taq DNA Polymerase:

Foreasy HS Taq DNA Polymerase

คำอธิบาย

Foreasy HS Taq DNA Polymerase เป็น DNA polymerase ที่แสดงออกในแบคทีเรียวิศวกรรม Escherichia coli โดยเทคโนโลยีการรวมตัวกันของยีนเอนไซม์ถูกรวมเข้ากับสารบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มีลักษณะเฉพาะ ซึ่งทำให้ผลิตภัณฑ์มีความทนทานสูงและเข้ากันได้ และสามารถใช้ตัวอย่าง lysate (ระบบ Foregene Lysis) เป็นแม่แบบสำหรับการตรวจจับปฏิกิริยาได้โดยตรง

แอปพลิเคชัน

PCR เชิงคุณภาพและการตรวจหา PCR เชิงปริมาณของแม่แบบที่บริสุทธิ์และแม่แบบที่ไม่บริสุทธิ์

ควบคุมคุณภาพ

1. ไม่พบกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก

2.วิธี PCR เพื่อตรวจหา DNA จีโนมที่เหลือโดยไม่มีโฮสต์

3.สามารถขยายยีนสำเนาเดียวในจีโนมมนุษย์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

4. เก็บที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์การเปลี่ยนแปลงกิจกรรมที่เห็นได้ชัด

รายละเอียดสินค้า: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/