การวิเคราะห์ปัญหาที่เป็นไปได้ต่อไปนี้ในแก้มไม้กวาด/เขตการค้าเสรี card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์อุดตัน

ในชุดนี้ ในการดำเนินการสกัด DNA จีโนม คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จะถูกดูดซับโดยตรงบนส่วนผสมของการสลายด้วยเอนไซม์ของตัวอย่างโดยไม่มีขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง และคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์อาจถูกบล็อกเนื่องจากเอนไซม์ที่ไม่สมบูรณ์และความหนืดสูงของตัวอย่าง

สาเหตุที่เป็นไปได้ดังต่อไปนี้:

1. การย่อยตัวอย่างเนื้อเยื่อด้วยเอนไซม์ไม่สมบูรณ์

คำแนะนำ: เวลาในการประมวลผลตัวอย่างของ Foregene Protease สามารถขยายได้อย่างเหมาะสม หรือสามารถเก็บส่วนเกินหลังจากการปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาที (~13,400× g) เป็นเวลา 5 นาที

2. การใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อหรือเนื้อเยื่อขนาดใหญ่มากเกินไป

คำแนะนำ: ไม่ควรเกิน 1แก้ม ไม้กวาดในตัวอย่างถ้าตัวอย่างมีขนาดใหญ่เกินไป ให้เพิ่มปริมาณของ Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ตามลำดับ

3. ความหนืดของตัวอย่างสูงเกินไป

คำแนะนำ: ตัวอย่างสามารถเจือจางอย่างเหมาะสมด้วย Tris-HCl 10 mM ก่อนการสกัด DNA ของจีโนม

4. เศษของการ์ดเลือดถูกดูด

คำแนะนำ: เวลาหมุนเหวี่ยงชั่วคราวของขั้นตอนที่ 6 ของการสกัดจีโนมจุดเลือด (FTA Card) สามารถขยายได้อย่างเหมาะสม

ผลผลิตต่ำหรือไม่มี DNA

มักจะมีปัจจัยหลายอย่างที่ส่งผลต่อผลผลิตจีโนมดีเอ็นเอ รวมถึงแหล่งกำเนิดตัวอย่าง สภาวะการเก็บตัวอย่าง การเตรียมตัวอย่าง การจัดการ ฯลฯ

ไม่สามารถรับ DNA ของจีโนมได้ในระหว่างการสกัด

สาเหตุที่เป็นไปได้มีดังนี้:

1. การเก็บรักษาตัวอย่างหรือการเก็บรักษาที่ไม่เหมาะสมเป็นเวลานานเกินไปนำไปสู่การย่อยสลายดีเอ็นเอของจีโนม

คำแนะนำ: ควรเก็บตัวอย่างจาก Oral Swab ใหม่ๆ และไม่แนะนำให้ใช้ Swab ที่เก็บรักษาไว้สำหรับการดำเนินการสกัด DNA ของจีโนมตัวอย่างจุดเลือดควรตรวจสอบให้มีคุณภาพและระยะเวลาการเก็บไม่ควรนานเกินไป

2. การใช้เนื้อเยื่อน้อยเกินไปอาจส่งผลให้ไม่มีการสกัดจีโนมดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้อง

คำแนะนำ: ปฏิบัติตามบัคคาl คำแนะนำในการสุ่มตัวอย่างตัวอย่างในคู่มือการใช้งาน และเช็ดให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้เพื่อให้เซลล์สามารถติดเข้ากับไม้กวาดในช่องปากได้เพียงพอสำหรับการสกัดจีโนมดีเอ็นเอสำหรับการสกัดตัวอย่างจุดเลือดสามารถเพิ่มพื้นที่การตัดจุดเลือดได้อย่างเหมาะสม

3. Foregene Protease ได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างไม่เหมาะสม ส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน

คำแนะนำ: ยืนยันเงื่อนไขการจัดเก็บของเอฟOregene Protease หรือแทนที่ด้วย Foregene Protease ใหม่สำหรับปฏิกิริยาของเอนไซม์

4. การเก็บรักษาชุดอุปกรณ์อย่างไม่เหมาะสมหรือเวลาในการจัดเก็บนานเกินไป ส่งผลให้ส่วนประกอบบางอย่างในชุดอุปกรณ์ทำงานล้มเหลว

คำแนะนำ: ซื้อใหม่แก้ม ตรวจดีเอ็นเอการแยกตัว ชุดสำหรับขั้นตอนที่เกี่ยวข้อง

5. Buffer WB ไม่เติมเอธานอลสัมบูรณ์

คำแนะนำ: ยืนยันว่า buffer WB เพิ่มปริมาตรเอธานอลสัมบูรณ์ที่ถูกต้อง

6. เติมสารชะลงในฟิล์มซิลิโคนอย่างไม่ถูกต้อง

คำแนะนำ: เพิ่ม 65องศาเซลเซียสหยดสารชะที่อุ่นไว้ล่วงหน้าลงไปตรงกลางของเยื่อหุ้มซิลิโคนแล้วทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ

Low-yield จีโนมดีเอ็นเอ โดดเดี่ยว

สาเหตุที่เป็นไปได้ดังต่อไปนี้:

1. การเก็บรักษาตัวอย่างหรือการเก็บรักษาที่ไม่เหมาะสมเป็นเวลานานเกินไปนำไปสู่การย่อยสลายดีเอ็นเอของจีโนม

คำแนะนำ: ควรเก็บตัวอย่างจาก Oral Swab ที่สดใหม่ และไม่ควรใช้ Swab ที่เก็บรักษาไว้สำหรับการสกัด DNA ของจีโนม

2. หากปริมาณตัวอย่างเนื้อเยื่อน้อยเกินไป ปริมาณ DNA ของจีโนมที่สกัดได้จะน้อยลง

คำแนะนำ: ทำตามคำแนะนำในการสุ่มตัวอย่างด้วย Oral Swab ในคู่มือการใช้งาน โดยเช็ดให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ เพื่อให้เซลล์สามารถติดเข้ากับ Oral Swab ได้เพียงพอสำหรับการสกัด DNA ของจีโนม

3. Foregene Protease ได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างไม่เหมาะสม ส่งผลให้กิจกรรมลดลงหรือหยุดทำงาน

คำแนะนำ: ยืนยันเงื่อนไขการจัดเก็บของthe Fหรือแทนที่ด้วย Oregene Protease ใหม่ Foregene Protease สำหรับปฏิกิริยาของเอนไซม์

4. ปัญหาการชะล้าง

คำแนะนำ: ใช้ Buffer EB ในการชะล้าง;ถ้าใช้ ddH₂O หรือสารชะอื่นๆ ยืนยันว่า pH ของสารชะอยู่ระหว่าง 7.0-8.5

5. eluate ไม่ได้ถูกเพิ่มทีละหยดอย่างถูกต้อง

คำแนะนำ: หยดสารชะลงไปตรงกลางของเยื่อซิลิโคนและทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการชะ

6. น้ำยาชะสะสมน้อยเกินไป

คำแนะนำ: ใช้ eluent สำหรับการชะ DNA ของจีโนมตามที่กำหนดในคำแนะนำเป็นอย่างน้อยไม่น้อย มากกว่า 15μl.

Lโอ้ความบริสุทธิ์ of จีโนมดีเอ็นเอโดดเดี่ยว

ความบริสุทธิ์ของจีโนมของ DNA ที่ต่ำอาจนำไปสู่ความล้มเหลวหรือผลลัพธ์ที่ไม่น่าพอใจของการทดลองขั้นปลาย เช่น: ไม่สามารถเปิดเอ็นไซม์ได้ PCR ไม่สามารถรับชิ้นส่วนของยีนที่สนใจได้ เป็นต้น

สาเหตุที่เป็นไปได้มีดังนี้:

1. มลพิษเฮเทอโรโปรตีน, มลพิษ RNA

การวิเคราะห์: ไม่ได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ Buffer PW;คอลัมน์การล้างบัฟเฟอร์ PW ไม่ได้ถูกล้างโดยใช้ความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ถูกต้อง

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีการตกตะกอนในส่วนลอยของตะกอนก่อนที่จะเติมเอทานอลต้องแน่ใจว่าได้ล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ตามคำแนะนำ และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้

2. มลพิษไอออนสิ่งเจือปน

การวิเคราะห์: คอลัมน์การล้างบัฟเฟอร์ WB ถูกละเว้นหรือล้างเพียงครั้งเดียว ส่งผลให้เกิดการปนเปื้อนของไอออนิกที่ตกค้าง

คำแนะนำ: อย่าลืมล้าง Buffer WB 2 ครั้งตามคำแนะนำเพื่อกำจัดไอออนที่ตกค้างให้ได้มากที่สุด

3. การปนเปื้อนของเอนไซม์ RNA

การวิเคราะห์: เพิ่ม RNases ต่างประเทศในบัฟเฟอร์การดำเนินการล้างบัฟเฟอร์ PW ไม่ถูกต้อง ส่งผลให้ RNase ตกค้าง ส่งผลต่อการดำเนินการทดลอง RNA ดาวน์สตรีม เช่น การถอดรหัสในหลอดทดลอง

คำแนะนำ: กรดนิวคลีอิกซีรีส์ Forgeneไอโซลาชุดคิทสามารถลบ RNA โดยไม่ต้องเติม RNase เพิ่มเติมดังนั้น ชุดแยก DNA ของ Buccal Swab/FTA Cardจำเป็น't เพิ่ม RNase;ต้องแน่ใจว่าได้ปฏิบัติตามคำแนะนำสำหรับคอลัมน์ Buffer PW Washing Purification และขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้

4. กากเอทานอล

การวิเคราะห์: Buffer WB ไม่ได้ทำการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าหลังจากล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์

คำแนะนำ: ดำเนินการหมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าที่ถูกต้องตามคำแนะนำ

5. มลพิษสิ่งเจือปนอื่น ๆ

การวิเคราะห์: ตัวอย่างที่บันทึกไว้หรือตัวอย่างพิเศษจะไม่ได้รับการปรับสภาพ

คำแนะนำ: ปฏิบัติต่อตัวอย่างอย่างละเอียดตามคำแนะนำ