ผู้แต่ง: หวัง เซียวหยาน, จ้าวเอ๋อหยู

หน่วย: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital ร่วมกับ Tongji University

ในปัจจุบัน ประเภทตัวอย่างหลักสำหรับการตรวจหากรดนิวคลีอิกของเชื้อโรคในระบบทางเดินหายใจคือไม้กวาดคอมีโซลูชันการเก็บรักษาตัวอย่างที่ใช้กันทั่วไปหลายประเภท ซึ่งทั้งหมดจำเป็นต้องแช่เย็นหรือแช่แข็งเพื่อการขนส่งและการจัดเก็บเป็นการยากที่จะควบคุมกระบวนการทั้งหมดของอุณหภูมิต่ำในระหว่างกระบวนการรวบรวมและขนส่ง และเป็นการยากที่จะควบคุมคุณภาพก่อนการทดสอบตัวอย่าง^[1-2].

RNase (RNase) เป็นเอ็นโดนิวคลีเอสที่ไฮโดรไลซ์ RNA โดยส่วนใหญ่จะแยกพันธะฟอสโฟไดเอสเทอร์ระหว่างนิวคลีโอไทด์โมเลกุลของ RNase มีความเสถียรมาก มีพันธะไดซัลไฟด์ในโครงสร้าง และกิจกรรมของมันไม่จำเป็นต้องมีไอออนบวกสองชนิด ดังนั้น RNase จึงไม่ถูกทำลายได้ง่าย และง่ายต่อการเปลี่ยนธรรมชาติแม้หลังจากอุณหภูมิสูงหรือใช้สารเปลี่ยนสภาพธรรมชาติRNases แบ่งออกเป็นภายนอกและภายนอกRNases ภายนอกสามารถถูกปล่อยออกมาในเวลาเดียวกันเมื่อเซลล์แตกออกดังนั้น การกำจัดบทบาทของ RNases ภายนอกจึงเป็นขั้นตอนที่สำคัญมากในกระบวนการสกัด RNARNases ภายนอกมีการกระจายอย่างกว้างขวางRNases มีอยู่ทั่วไปในอากาศ ผิวหนัง เส้นผม และน้ำลาย ซึ่งเป็นสาเหตุสำคัญที่ทำให้ RNA ย่อยสลายได้ง่าย^[3].

แบบสอบถามข้อมูล

CANS-CL02-A009 “การประยุกต์ใช้แนวทางการรับรองคุณภาพและสมรรถนะห้องปฏิบัติการทางการแพทย์ในสาขาการวินิจฉัยระดับโมเลกุล” ในข้อกำหนดทางเทคนิคเสนอว่าควรมีการกำหนดมาตรฐานคุณภาพน้ำที่เหมาะสมตามการใช้งานภาชนะบรรจุสุญญากาศแบบใช้แล้วทิ้ง:

RNase / การจำแนกประเภท

(1) อาร์เนส เอ

Ribonuclease A (RNase A) ที่ได้จากตับอ่อนของวัวเป็น endoribonuclease ที่สามารถโจมตี 3 ปลายของ pyrimidine ที่ตกค้างบน RNA โดยตัดไซโตซีนหรือยูราซิลที่เกิดจากนิวคลีโอไทด์ที่อยู่ติดกันพันธะฟอสโฟไดเอสเทอร์ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของปฏิกิริยาคือนิวคลีโอไทด์ไพริมิดีน 3 ′และโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่มีนิวคลีโอไทด์ไพริมิดีน 3′ ที่ปลาย

(2) อาร์เนส T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) ได้มาจากเชื้อรา Aspergillus orjzae โดยทำหน้าที่เฉพาะกับฟอสเฟตที่ปลาย 3′ ของกัวนีน และบริเวณรอยแยกอยู่ระหว่าง 3′ ฟอสเฟตของกัวนีนกับไฮดรอกซิล 5′ ของนิวคลีโอไทด์ที่อยู่ติดกันผลิตภัณฑ์สุดท้ายของปฏิกิริยาคือกรด 3′guanylic และชิ้นส่วน oligonucleotide โดยมีกรด 3′guanylic อยู่ที่ส่วนท้าย

(3) อาร์เนส เอช

ไรโบนิวคลีเอส เอช (RNase H) ถูกค้นพบครั้งแรกจากเนื้อเยื่อไธมัสของลูกวัว และยีนเข้ารหัสของมันถูกโคลนเข้าไปใน Escherichia coliโดยเฉพาะอย่างยิ่งสามารถย่อยสลาย DNA: สาย RNA ใน RNA ไฮบริดดูเพล็กซ์ ส่งผลให้โอลิโกนิวคลีโอไทด์และโมโนนิวคลีโอไทด์ที่มีปลายสาย 3′-OH และ 5′-โมโนฟอสเฟต ไม่สามารถย่อยสลาย DNA หรือ RNA สายเดี่ยวหรือสายคู่ได้

อาร์เนส

ฟังก์ชั่นและการใช้งาน

ไรโบนิวคลีเอสสามารถกระตุ้นการย่อยสลายของกรดไรโบนิวคลีอิก (RNA) และสามารถสังเคราะห์ขึ้นเองครีมสมุนไพรใช้ทาเพื่อรักษาอาการบาดเจ็บและอาการปวดข้อตามรายงาน ไรโบนิวคลีเอสสามารถเปลี่ยนเมแทบอลิซึมของเซลล์โฮสต์ ยับยั้งการสังเคราะห์ไวรัส ยับยั้งการแพร่กระจายของไวรัสไข้หวัดใหญ่ในหลอดทดลอง และยับยั้งการก่อตัวของวัคซีนและไวรัสเริมในตัวอ่อนของไก่การใช้ไรโบนิวคลีเอสทางคลินิกฉีดเข้ากล้ามทุกวันขนาด 180 มก. ซึ่งเป็นประโยชน์ต่อการรักษาโรคไข้สมองอักเสบ ไรโบนิวคลีเอสสามารถกระตุ้นการย่อยสลายของกรดไรโบนิวคลีอิก (RNA) และปัจจุบันสามารถสังเคราะห์ขึ้นเองครีมสมุนไพรใช้ทาเพื่อรักษาอาการบาดเจ็บและอาการปวดข้อตามรายงาน ไรโบนิวคลีเอสสามารถเปลี่ยนเมแทบอลิซึมของเซลล์โฮสต์ ยับยั้งการสังเคราะห์ไวรัส ยับยั้งการแพร่กระจายของไวรัสไข้หวัดใหญ่ในหลอดทดลอง และยับยั้งการก่อตัวของวัคซีนและไวรัสเริมในตัวอ่อนของไก่การใช้ไรโบนิวคลีเอสทางคลินิกฉีดเข้ากล้ามทุกวันขนาด 180 มก. มีประโยชน์ในการรักษาโรคไข้สมองอักเสบจากการแพร่ระบาด

อาร์เนส

คำจำกัดความของสารยับยั้ง

คำจำกัดความของหน่วยยับยั้ง RNase: ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการยับยั้ง 50% ของกิจกรรมของ 5ng RNase A คือหนึ่งหน่วย

วิธีการทำงานของสารยับยั้ง RNase

ไอโซไทโอไซยาเนตของกัวนิดีน:

Guanidine isothiocyanate เป็นสารประกอบอินทรีย์ที่มีสูตรโมเลกุล C2H6N4Sส่วนใหญ่ใช้ในยาชีวภาพ สารเคมีรีเอเจนต์ ฯลฯ Guanidine isothiocyanate เป็นสารสลายโปรตีน และมักถูกใช้เป็นองค์ประกอบหลักของสารละลายสลายในสารทำปฏิกิริยาวินิจฉัยระดับโมเลกุลมันสามารถแยกเนื้อเยื่อ ทำลายโครงสร้างเซลล์ และแยกกรดนิวคลีอิกออกจากนิวคลีโอโปรตีน และมีผลทำให้ RNase เสียสภาพอย่างรุนแรงเป็นตัวยับยั้ง RNase ที่มีประสิทธิภาพสูงสุดในปัจจุบัน

TRIzol เป็นรีเอเจนต์การสกัด RNA ทั้งหมดแบบใหม่ที่สามารถสกัด RNA ทั้งหมดจากเซลล์หรือเนื้อเยื่อได้โดยตรงประกอบด้วยสารต่างๆ เช่น ฟีนอลและกัวนิดีน ไอโซไทโอไซยาเนต ซึ่งสามารถทำลายเซลล์อย่างรวดเร็วและยับยั้งนิวคลีเอสที่ปล่อยออกมาจากเซลล์

(อย่างไรก็ตาม guanidine isothiocyanate เป็นอันตรายต่อสุขภาพของนักวิจัยในห้องปฏิบัติการ)

อาร์นาซิน:

กรดไกลโคโปรตีนสกัดจากตับหนูหรือบลาสโตเดิร์มของมนุษย์Rnasin เป็นตัวยับยั้ง RNase ที่ไม่สามารถแข่งขันได้ ซึ่งสามารถจับกับ RNases ต่างๆ เพื่อหยุดการทำงานของมัน

(รายละเอียดเพิ่มเติม:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hอุณหภูมิสูง:

อุณหภูมิสูงยังเป็นวิธีการทั่วไปของการสูญเสียโปรตีน

ไดเอทิลไพโรคาร์บอเนต (DEPC):

DEPC เป็นตัวยับยั้ง RNase ที่แข็งแรงแต่ไม่สมบูรณ์ ซึ่งสามารถยับยั้งการทำงานของ RNase ได้โดยการรวมตัวกับวงแหวนของกรดอะมิโน imidazole ของกลุ่มที่ออกฤทธิ์ของ RNase เพื่อทำลายโปรตีน

วานาดิล ไรโบนิวคลีโอไซด์ คอมเพล็กซ์:

สารเชิงซ้อนที่เกิดจากวานาเดียมออกไซด์ไอออนและนิวคลีโอไซด์ซึ่งจับกับ RNase ในรูปของสารทรานซิชัน ซึ่งสามารถยับยั้งการทำงานของ RNase ได้เกือบทั้งหมด

อื่น:

SDS, ยูเรีย, ดินเบา ฯลฯ มีผลยับยั้ง RNase ด้วยเช่นกัน

บทวิจารณ์จากผู้เชี่ยวชาญ

Li Yujie หัวหน้าช่างเทคนิค

ผู้อำนวยการแผนกห้องปฏิบัติการ โรงพยาบาล Jiaozhou โรงพยาบาล Dongfang ร่วมกับมหาวิทยาลัย Tongji

เพื่อป้องกันการย่อยสลายทางชีวภาพของ RNase จากภายนอก ควรสวมหน้ากาก ถุงมือ และหมวกและเปลี่ยนบ่อยๆ ในระหว่างกระบวนการสกัด RNAเครื่องแก้วทั้งหมดต้องอบในเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 200°C นานกว่า 2 ชั่วโมงวัสดุที่ใช้ในการอบ เช่น พลาสติก จำเป็นต้องผ่านการบำบัดด้วยน้ำ DEPC แล้วล้างด้วยน้ำกลั่นรีเอเจนต์หรืออุปกรณ์ที่ใช้สำหรับการสกัด การเก็บรักษา และการระบุ RNA ควรกำหนดไว้สำหรับ RNA โดยเฉพาะ และควรตั้งค่าพื้นที่ปฏิบัติการ RNA ที่เป็นอิสระ

ข้อมูลอ้างอิง:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J และคณะแบคทีเรียและไวรัสในช่องจมูกทันทีก่อนที่จะเริ่มมีอาการติดเชื้อทางเดินหายใจส่วนล่างเฉียบพลันในเด็กพื้นเมืองของออสเตรเลีย[J]Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] สาขาการควบคุมการติดเชื้อในโรงพยาบาลของสมาคมเวชศาสตร์ป้องกันจีนแนวทางการเก็บและตรวจสอบตัวอย่างจุลินทรีย์ทางคลินิก [J].วารสารจีนเกี่ยวกับการติดเชื้อในโรงพยาบาล 2018(20):3192-3200.

[3] “การทดสอบทางคลินิกหนึ่งหมื่นทำไมปริมาณการทดสอบอณูชีววิทยา”