การแนะนำ:

RNA ชื่อวิทยาศาสตร์ กรดไรโบนิวคลีอิก ตัวย่อมาจาก กรดไรโบนิวคลีอิก เป็นกรดนิวคลีอิกชนิดหนึ่ง เกิดจากการเชื่อมต่อไรโบนิวคลีโอไทด์อย่างน้อยหลายสิบตัวผ่านพันธะฟอสโฟไดเอสเทอร์

สมมติฐานของการสำรวจ RNA คือการสกัด Total RNA ที่ปราศจากมลพิษ และสามารถสรุปหลักการพื้นฐานของการสกัด RNA ได้คร่าวๆ ดังนี้:

1. ทำลายเซลล์ก่อน

2. จากนั้นกำจัดสิ่งเจือปนในระดับโมเลกุลขนาดใหญ่ (โปรตีน ไขมัน DNA ฯลฯ)

3. ในที่สุด RNA จะตกตะกอนในขณะที่กำจัดเกลือและตัวทำละลายอินทรีย์ และทำให้ RNA บริสุทธิ์ต่อไป

วิธีการสกัดในอดีตและปัจจุบัน

วิธีการสกัด RNA รุ่นแรกคือวิธีการตกตะกอน TRIzol (รีเอเจนต์ที่ใช้ ได้แก่ guanidine isothiocyanate, ฟีนอล, คลอโรฟอร์ม ฯลฯ) ซึ่งคิดค้นโดยคุณปู่ชื่อ Piotr Chomczynski และคุณย่า Nicoletta Sacchi เนื่องจากการประดิษฐ์นี้ช่วยให้การสกัด RNA ทำได้ง่ายและรวดเร็ว ตั้งแต่นั้นเป็นต้นมา การวิจัย RNA ก็เริ่มต้นขึ้นอย่างรวดเร็ว

ต่อมาคุณปู่ได้ขายสิทธิบัตรนี้ให้กับ Invitrogen และ Invitrogen ได้เผยแพร่วิธีนี้ไปทั่วโลกและกลายเป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย

ต่อมา Thermo ได้ซื้อ Invitrogen!

ผลิตภัณฑ์ที่เป็นตัวแทน: รีเอเจนต์ TRIzol ของ Invitrogen

อย่างไรก็ตาม วิธีการตกตะกอนของ TRIzol ต้องมีการตกตะกอนและการสกัด RNA หลายครั้ง และรีเอเจนต์ที่ใช้นั้นเป็นพิษและใช้เวลานานในการทำงาน

ดังนั้น วิธีการทำให้บริสุทธิ์ด้วยเอนไซม์คอลัมน์รุ่นที่สองจึงถือกำเนิดขึ้น โดยใช้เมมเบรนซิลิกาเจลเป็นวัสดุดูดซับกรดนิวคลีอิกที่เฉพาะเจาะจง เพื่อเพิ่มการฟื้นตัวของ RNA ในตัวอย่างให้ได้สูงสุด ในขณะที่กำจัดสิ่งเจือปนอื่นๆ

วิธีการรุ่นที่สองทำให้การทำงานง่ายขึ้นบนพื้นฐานของประสิทธิภาพที่เสถียร ลดปัจจัยเสี่ยง และปรับปรุงประสิทธิภาพของการสกัด RNA

ผลิตภัณฑ์ตัวแทน: QIAGEN RNeasy และผลิตภัณฑ์ในประเทศส่วนใหญ่

อย่างไรก็ตาม ทั้งวิธีที่หนึ่งและสองจำเป็นต้องใช้ DNase เพื่อกำจัดการปนเปื้อนของ DNA ซึ่งทำให้เกิดความไม่สะดวกในการทดลองขั้นต่อไปDNase ที่ตกค้างจะลดประสิทธิภาพของการถอดรหัสย้อนกลับและลดการสังเคราะห์ cDNA สายแรก ซึ่งส่งผลต่อความแม่นยำของผลลัพธ์

ดังนั้น วิธีการสกัดรุ่นที่สามจึงได้รับการปรับให้เหมาะสมบนพื้นฐานของรุ่นที่สองการทดลองนี้ไม่จำเป็นต้องเติมเอ็นไซม์ใดๆ และสามารถรับ RNA ได้ง่ายด้วยสองคอลัมน์เท่านั้น

คอลัมน์ 1: คอลัมน์ทำความสะอาด DNA ล้าง DNA

คอลัมน์ 2: คอลัมน์เฉพาะ RNA ดูดซับและกู้คืน RNA โดยเฉพาะ

การดำเนินการที่เรียบง่ายดังกล่าวไม่เพียงช่วยประหยัดเวลา แต่ยังอำนวยความสะดวกในการดำเนินการทดลองขั้นปลายอีกด้วย!

ผลิตภัณฑ์ตัวแทน: QIAGEN RNeasy Plus และฟอร์เจนผลิตภัณฑ์ชุดการทำให้บริสุทธิ์ RNA

(อาร์เนียส พลัส)

（ฟอร์เจเนียชุดแยก RNA ทั้งหมดของพืช）

บอกให้เงียบ!ชุด RNA ของ Foregene ยังนำเสนอ RNase Eraser ที่ใช้งานง่ายสุดๆ ซึ่งสามารถกำจัด RNase 400μg บนพื้นผิวของแข็งได้อย่างสมบูรณ์ภายใน 1 นาที โดยไม่ต้องเพิ่มสารพิษใดๆ ให้กับร่างกายมนุษย์!

รูปภาพ1: แผนภูมิเปรียบเทียบกระบวนการปฏิบัติงาน

ผลิตภัณฑ์ของ Foregene สามารถสกัด RNA ให้เสร็จภายในเวลาเพียงสองเพลง อย่าทำให้คนอื่นอิจฉาความคืบหน้าในการทดลองของคุณ!

รูปภาพ2:Eผลการทดลอง แผนภูมิเปรียบเทียบ

รุ่นแรก (1: TRIzol)

รุ่นที่สอง (2: RNeasy of QIAGEN)

รุ่นที่สาม (3: RNeasy plus ของ QIAGEN, 4: Foregene)

รูปภาพ3: กราฟ qPCR (กราฟเส้นโค้งการขยายสัญญาณ)

รุ่นแรก (สีเขียวหมายถึง TRIzol -, สีแดงหมายถึง TRIzol +)

รุ่นที่สอง (สีฟ้าหมายถึง QIAGEN RNeasy- สีแดงหมายถึง QIAGEN RNeasy +)

รุ่นที่สาม (สีฟ้าหมายถึง QIAGEN RNeasy plus สีเขียวหมายถึง Foregene)

(หมายเหตุ: กราฟ qPCR “-” แสดงว่าไม่มีการเพิ่ม DNase และไม่มีการลบการปนเปื้อนของ DNA ดังนั้น CT จึงสูงกว่าและผลลัพธ์ไม่ถูกต้อง “+” แสดงว่ามีการเพิ่ม DNase และลบการปนเปื้อนของ DNA ผลลัพธ์จึงถูกต้อง)

การอัปเกรดทางเทคนิคทุกครั้งหมายความว่าการดำเนินการของการทดสอบกำลังพัฒนาไปในทิศทางที่ง่ายขึ้นและเป็นมิตรกับผู้ใช้มากขึ้น

Foregene มีเป้าหมายเพื่อช่วยให้นักวิจัยทางวิทยาศาสตร์จำนวนมากขึ้นประหยัดเวลาและค่าใช้จ่ายในการทดลอง ได้ผลการทดลองคุณภาพสูง และร่วมกันสร้างผลสำเร็จการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ที่มีคุณค่ามากขึ้น