คู่มือวิเคราะห์ปัญหา

ต่อไปนี้คือการวิเคราะห์ปัญหาที่อาจพบในการสกัด DNA/RNA ของไวรัส โดยหวังว่าจะเป็นประโยชน์กับการทดลองของคุณนอกจากนี้ สำหรับปัญหาเชิงทดลองหรือทางเทคนิคอื่นๆ นอกเหนือจากคำแนะนำการใช้งานและการวิเคราะห์ปัญหา เรามีการสนับสนุนทางเทคนิคโดยเฉพาะเพื่อช่วยเหลือคุณหากคุณมีความต้องการใด ๆ โปรดติดต่อเรา: 028-83360257 หรือ E-mail:

Tech@foregene.com.

ไม่มีการสกัดกรดนิวคลีอิกหรือผลผลิตกรดนิวคลีอิกต่ำ

โดยปกติแล้วมีหลายปัจจัยที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการกู้คืน เช่น ปริมาณกรดนิวคลีอิกตัวอย่าง วิธีการดำเนินการ ปริมาณการชะ ฯลฯ

การวิเคราะห์สาเหตุทั่วไป:

1. ดำเนินการปั่นแยกในอ่างน้ำแข็งหรืออุณหภูมิต่ำ (4°C) ระหว่างขั้นตอน

คำแนะนำ: ทำงานที่อุณหภูมิห้อง (15-25°C) ตลอดกระบวนการทั้งหมด ห้ามแช่น้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ

2. เก็บตัวอย่างไม่ถูกต้องหรือเก็บตัวอย่างไว้นานเกินไป

คำแนะนำ: เก็บตัวอย่างที่อุณหภูมิ -80°C และหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการละลายซ้ำพยายามใช้ตัวอย่างที่เก็บใหม่สำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิก

3. การสลายตัวอย่างไม่เพียงพอ

คำแนะนำ: โปรดตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ผสมตัวอย่างและสารละลายสำหรับการสลายตัวอย่างทั่วถึงและบ่มที่อุณหภูมิห้อง (15-25°C) เป็นเวลา 10 นาที

4. การเติมสารชะล้างไม่ถูกต้อง

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เติม ddH2O ที่ปราศจากสาร RNase ลงไปตรงกลางเมมเบรนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ และอย่าหยดลงบนวงแหวนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์

5. ไม่ได้เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RW2

คำแนะนำ: โปรดทำตามคำแนะนำ เติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RW2 และผสมให้เข้ากันก่อนใช้ชุด

6. ปริมาณตัวอย่างที่ไม่เหมาะสม

คำแนะนำ: ประมวลผลตัวอย่าง 200µl สำหรับ Buffer DRL ทุก ๆ 500µlการประมวลผลตัวอย่างมากเกินไปจะส่งผลให้ผลผลิตในการสกัดกรดนิวคลีอิกลดลง

7. ปริมาณการชะที่ไม่เหมาะสมหรือการชะที่ไม่สมบูรณ์

คำแนะนำ: ปริมาตรชะล้างของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์คือ 30-50μl;หากผลการชะไม่เป็นที่พอใจ แนะนำให้ยืดเวลาที่อุณหภูมิห้องหลังจากเติม ddH2O ที่ปราศจาก RNase ที่อุ่นแล้ว เช่น 5-10 นาที

8. เอทานอลยังคงอยู่ในคอลัมน์หลังจากล้างด้วย Buffer RW2

คำแนะนำ: หากเอทานอลยังคงอยู่หลังจากการปั่นแยกด้วย Buffer RW2 เป็นเวลา 2 นาที สามารถวางคอลัมน์ไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากการปั่นแยกเพื่อขจัดเอทานอลที่ตกค้างออกจนหมด

กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์จะถูกย่อยสลาย

คุณภาพของกรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์เกี่ยวข้องกับการเก็บรักษาตัวอย่าง การปนเปื้อน RNase การทำงาน และปัจจัยอื่นๆการวิเคราะห์สาเหตุทั่วไป:

1. เก็บตัวอย่างไม่ทันเวลา

คำแนะนำ: หากตัวอย่างไม่ได้ใช้หลังจากเก็บเสร็จทันเวลา โปรดเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำ -80°C ทันทีสำหรับการสกัด RNA ให้ลองใช้ตัวอย่างที่เก็บมาใหม่

2. เก็บตัวอย่างและแช่แข็งและละลายซ้ำๆ

คำแนะนำ: หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการละลาย (ไม่เกินหนึ่งครั้ง) ระหว่างการเก็บและจัดเก็บตัวอย่าง มิฉะนั้น ผลผลิตกรดนิวคลีอิกจะลดลง

3. RNase ถูกนำมาใช้ในห้องผ่าตัดหรือไม่สวมถุงมือ หน้ากาก ฯลฯ แบบใช้แล้วทิ้ง

คำแนะนำ: การทดลองสกัด RNA ทำได้ดีที่สุดในห้องผ่าตัดแยก RNA และควรทำความสะอาดโต๊ะห้องปฏิบัติการก่อนทำการทดลอง

สวมถุงมือและหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้งในระหว่างการทดลองเพื่อหลีกเลี่ยงการย่อยสลาย RNA ที่เกิดจากการแนะนำของ RNase ในระดับสูงสุด

4. รีเอเจนต์ปนเปื้อน RNase ระหว่างการใช้งาน

คำแนะนำ: แทนที่ด้วย Viral DNA/RNA Isolation Kit ใหม่สำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้อง

5. หลอดหมุนเหวี่ยงและปลายปิเปตที่ใช้สำหรับการจัดการ RNA ปนเปื้อนด้วย RNase

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าหลอดปั่นเหวี่ยง ทิปปิเปต ปิเปต ฯลฯ ที่ใช้สำหรับการสกัด RNA นั้นปราศจาก RNase ทั้งหมด

กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์ส่งผลต่อการทดลองขั้นปลาย

DNA และ RNA ทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ หากปริมาณเกลือไอออนและโปรตีนสูงเกินไป จะส่งผลต่อการทดลองขั้นปลาย เช่น: การขยาย PCR, การถอดความแบบย้อนกลับ เป็นต้น

1. DNA และ RNA ที่ถูกชะนั้นมีไอออนของเกลือหลงเหลืออยู่

คำแนะนำ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเติมเอทานอลสัมบูรณ์ในปริมาตรที่ถูกต้องลงใน Buffer RW2 และล้างคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สองครั้งด้วยความเร็วการหมุนเหวี่ยงที่ระบุในคู่มือการใช้งานหมุนเหวี่ยงเพื่อลดการปนเปื้อนของเกลือไอออน

2. DNA และ RNA ที่ถูกชะนั้นมีเอทานอลตกค้างอยู่

คำแนะนำ: หลังจากยืนยันการล้างด้วย Buffer RW2 ให้หมุนเหวี่ยงหลอดเปล่าด้วยความเร็วการหมุนเหวี่ยงในคู่มือการใช้งานหากยังมีเอทานอลตกค้าง คุณสามารถปั่นแยกหลอดเปล่าแล้ววางไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดเอธานอลที่ตกค้างออกให้ได้มากที่สุด

คู่มือการใช้งาน:

คู่มือการใช้งานชุดแยก DNA&RNA ของไวรัส