W:พี่ชาย การถอดความแบบย้อนกลับเสร็จสมบูรณ์ และสุดท้ายคือขั้นตอนสุดท้าย – PCR เชิงปริมาณเรืองแสง!เฮ้ พี่ชาย PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์คืออะไร
M:PCR คุณรู้เสมอใช่ไหม?
W:คุณรู้ไหม PCR คือปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส และเป็นเทคโนโลยีที่เพิ่ม DNA!
ม: เกือบแล้ว… เป็นวิธีการทางเทคนิคในการขยายลำดับเป้าหมายให้มากกว่าหนึ่งล้านเท่าผ่านไพรเมอร์เฉพาะ แต่วิธีนี้บ่งชี้ว่ามีหรือไม่มีลำดับเป้าหมายเท่านั้น และไม่สามารถระบุจำนวนของเทมเพลตเริ่มต้นได้PCR เชิงปริมาณเรืองแสงเป็นวิธีการทางเทคนิคที่พัฒนาขึ้นเพื่อแก้ปัญหานี้PCR ตามเวลาจริงและ PCR ปริมาณ (qPCR) โดยทั่วไปอ้างถึง
W:ความแตกต่างจาก PCR ทั่วไปอยู่ที่ปริมาณการเรืองแสง?
ตอบ: ใช่ นั่นคือ ในระยะขยายของแต่ละรอบ PCR จะตรวจพบความเข้มของสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ และสามารถคำนวณจำนวนแม่แบบเริ่มต้นได้ตามการเปลี่ยนแปลงของความเข้มของสัญญาณ
W: รู้สึกซับซ้อนจัง!ฉันต้องคำนวณด้วยตัวเองหรือไม่?
ตอบ: คุณต้องเรียนรู้อย่างช้าๆ เป็นการดีที่สุดที่จะสามารถเข้าใจหลักการได้ตอนนี้ คุณสามารถมุ่งเน้นไปที่ค่า CT ก่อน ซึ่งเป็นข้อมูลการทดลองที่ค่อนข้างเข้าใจได้ง่าย และขนาดของมันสอดคล้องกับขนาดของจำนวนเทมเพลตเริ่มต้นนอกจากนี้ยังมีกราฟเช่นเส้นโค้งการขยายและเส้นโค้งการหลอมละลายพวกเขาเป็นผู้ตัดสินขั้นสุดท้ายว่าการทดสอบของคุณจะสำเร็จหรือไม่
ว:อ้าวพี่จากนั้นฉันจะทำการทดลอง qPCR!
M:ระวังเป็นพิเศษที่จะไม่ใส่แม่แบบลงในพื้นที่น้ำยา มิฉะนั้น ส่วนผสมที่ไม่ได้ใช้ของคุณจะปนเปื้อนได้ง่าย!
ว: เข้าใจแล้ว!

PCR แบบเรียลไทม์ Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

ประสิทธิภาพสูงขึ้น มีความเฉพาะเจาะจงมากขึ้น
ความไวสูง ความเข้ากันได้ดี